24小时热门版块排行榜    

查看: 786  |  回复: 10
当前主题已经存档。

xiaorong-er

金虫 (正式写手)

[交流] 为什么我提的RNA总是低于1.8

我提了好几次RNA,第一次检测没有18s和28s,第二次提的时候有一些样品有18s和28s。我都是按照试验严格操作的,我提的是肝脏的样品,用TRNzol提取的,试验用品都经过无RNA酶处理了,不过偶尔有样品在液氮研磨过程中有时候液氮完全挥发了,组织匀浆机不知道怎么处理才好,我们的移液器也没有专门的,不知道怎么处理才无污染,试验台也没有专门的,比较郁闷,实在找不出哪里出问题,是不是每个步骤都得特别小心才会不使提取的RNA降解?还有就是我的样品放了快一年了,会不会也对提RNA有影响?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader


xiaorong-er(金币+1,VIP+0): 4-26 19:35
建议上传图片
会当凌绝顶,一览众山小
2楼2009-04-26 03:40:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangtengxu

木虫 (正式写手)


xiaorong-er(金币+1,VIP+0): 4-26 19:35
上图
要么污染
要么TISISOL不适合你的组织
想和有趣的人一起做有趣的事。
3楼2009-04-26 08:16:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)


xiaorong-er(金币+1,VIP+0): 4-26 19:35
可能是你的样品存放的问题,一般都是加上TRNzol裂解后,不离心直接冻于-70,可保存一年。一般提RNA要用新鲜的组织。液氮研磨过程中注意补充液氮,不要让其完全挥发,其他的,只要枪头和指管用DEPC处理好或者2次灭菌,其他的仪器不用这么太紧张,毕竟RNA酶无处不在。
4楼2009-04-26 10:16:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiaminl

铁杆木虫 (知名作家)

友情支持
Nevergiveup!
5楼2009-04-26 12:57:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

your2007

至尊木虫 (著名写手)


xiaorong-er(金币+1,VIP+0): 4-26 19:35
同情中,尽管考虑各种因素,也可能导致实验失败,况且肝脏中酶系丰富,诸如RNase,微粒体酶等等,可尝试在先trizol变性和液氮未蒸发前处理样品,实在不行,还可以考虑实验简易的组织捣碎棒(可以特殊处理),然后试剂盒提取算了。
爱人者被爱,敬人者人敬
6楼2009-04-26 13:43:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhlq_mail

铜虫 (小有名气)


xiaorong-er(金币+1,VIP+0): 4-26 19:35
我认为1.样品可能有问题
2.TRNzol有问题,是哪个公司?
建议多加一倍的TRNzo量,研磨要彻底,染色可用EB后染,结果应该很漂亮呀兄弟!

[ Last edited by zhlq_mail on 2009-4-26 at 13:55 ]
7楼2009-04-26 13:53:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

x8q4h11

木虫 (小有名气)


xiaorong-er(金币+1,VIP+0): 4-26 19:35
应该是样品的问题   换用新鲜肝脏吧
8楼2009-04-26 18:27:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaorong-er

金虫 (正式写手)

我也不可能取样了,只能用先前取的样品哦。图像怎么传呀?TRNzol买了也快1年了,是不是真的也会有问题。试剂盒应该很贵吧,老板估计舍不得出钱的。
9楼2009-04-26 19:37:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

genomelin

银虫 (小有名气)

先看看Trizol是不是假的,最近英俊的技术说他们的trizol假的太多了,会影响效果。
组织是不能在-80放太久的, 并且组织在处理的时候,如果切得块过大,当时也是冻不透的,RNA也会降解;还有你跑胶的RNA上样量不要太大,5S会带走染料的,600ng左右的total RNA就可以应用于EB非变性胶的。每次的电泳液最好都用新的,保证跑胶过程中不会降解,也可用bioanalyzer替代,更清楚。试剂盒还是挺便宜的,可以与Trizol配套用的

[ Last edited by genomelin on 2009-4-26 at 23:15 ]
10楼2009-04-26 23:00:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaorong-er 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +37 医学老男孩 2026-08-13 87/4350 2026-08-18 06:35 by 医学老男孩
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +4 基诺咪客 2026-08-17 4/200 2026-08-17 16:10 by Vivilian
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
请填处理意见