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xiaorong-er

金虫 (正式写手)

[交流] 为什么我提的RNA总是低于1.8

我提了好几次RNA,第一次检测没有18s和28s,第二次提的时候有一些样品有18s和28s。我都是按照试验严格操作的,我提的是肝脏的样品,用TRNzol提取的,试验用品都经过无RNA酶处理了,不过偶尔有样品在液氮研磨过程中有时候液氮完全挥发了,组织匀浆机不知道怎么处理才好,我们的移液器也没有专门的,不知道怎么处理才无污染,试验台也没有专门的,比较郁闷,实在找不出哪里出问题,是不是每个步骤都得特别小心才会不使提取的RNA降解?还有就是我的样品放了快一年了,会不会也对提RNA有影响?
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader


xiaorong-er(金币+1,VIP+0): 4-26 19:35
建议上传图片
会当凌绝顶,一览众山小
2楼2009-04-26 03:40:45
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wangtengxu

木虫 (正式写手)


xiaorong-er(金币+1,VIP+0): 4-26 19:35
上图
要么污染
要么TISISOL不适合你的组织
想和有趣的人一起做有趣的事。
3楼2009-04-26 08:16:20
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)


xiaorong-er(金币+1,VIP+0): 4-26 19:35
可能是你的样品存放的问题,一般都是加上TRNzol裂解后,不离心直接冻于-70,可保存一年。一般提RNA要用新鲜的组织。液氮研磨过程中注意补充液氮,不要让其完全挥发,其他的,只要枪头和指管用DEPC处理好或者2次灭菌,其他的仪器不用这么太紧张,毕竟RNA酶无处不在。
4楼2009-04-26 10:16:08
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jiaminl

铁杆木虫 (知名作家)

友情支持
Nevergiveup!
5楼2009-04-26 12:57:33
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your2007

至尊木虫 (著名写手)


xiaorong-er(金币+1,VIP+0): 4-26 19:35
同情中,尽管考虑各种因素,也可能导致实验失败,况且肝脏中酶系丰富,诸如RNase,微粒体酶等等,可尝试在先trizol变性和液氮未蒸发前处理样品,实在不行,还可以考虑实验简易的组织捣碎棒(可以特殊处理),然后试剂盒提取算了。
爱人者被爱,敬人者人敬
6楼2009-04-26 13:43:39
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zhlq_mail

铜虫 (小有名气)


xiaorong-er(金币+1,VIP+0): 4-26 19:35
我认为1.样品可能有问题
2.TRNzol有问题,是哪个公司?
建议多加一倍的TRNzo量,研磨要彻底,染色可用EB后染,结果应该很漂亮呀兄弟!

[ Last edited by zhlq_mail on 2009-4-26 at 13:55 ]
7楼2009-04-26 13:53:07
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x8q4h11

木虫 (小有名气)


xiaorong-er(金币+1,VIP+0): 4-26 19:35
应该是样品的问题   换用新鲜肝脏吧
8楼2009-04-26 18:27:10
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xiaorong-er

金虫 (正式写手)

我也不可能取样了,只能用先前取的样品哦。图像怎么传呀?TRNzol买了也快1年了,是不是真的也会有问题。试剂盒应该很贵吧,老板估计舍不得出钱的。
9楼2009-04-26 19:37:23
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genomelin

银虫 (小有名气)

先看看Trizol是不是假的,最近英俊的技术说他们的trizol假的太多了,会影响效果。
组织是不能在-80放太久的, 并且组织在处理的时候,如果切得块过大,当时也是冻不透的,RNA也会降解;还有你跑胶的RNA上样量不要太大,5S会带走染料的,600ng左右的total RNA就可以应用于EB非变性胶的。每次的电泳液最好都用新的,保证跑胶过程中不会降解,也可用bioanalyzer替代,更清楚。试剂盒还是挺便宜的,可以与Trizol配套用的

[ Last edited by genomelin on 2009-4-26 at 23:15 ]
10楼2009-04-26 23:00:23
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