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tianhua

木虫 (正式写手)

[交流] 请教一个梯度程序的理解问题!

各位前辈:
请问下这个梯度条件:
HPLC色谱方法:流动相A为0.2%磷酸水溶液,流动相B为0.2%磷酸甲醇溶液,梯度条件为:
1 :0min, A:B=80:20(V /v)
2 :30min, A:B=60:40(V /v)
3:37min ,A:B=52:48(V /v)
4:47 min, A:B=52:48(V /v)
5: 55 min, A:B=0:100(V /v)
6:60min, A:B=80:20(V /v)
7:70min,stop
我的问题有:
1 为什么要在第3与4个时间点设一个等度洗脱呢?为什么不直接设成以下这个梯度程序呢?
1 :0min, A:B=80:20(V /v)
2 :30min, A:B=60:40(V /v)
3:37min ,A:B=52:48(V /v)
4: 55 min, A:B=0:100(V /v)
5:60min, A:B=80:20(V /v)
6:70min,stop
2 第60min, A:B=80:20(V /v),是为了平衡柱子吗?
第三个问题:就在在进样前,一般要让梯度程序走一下空白,请问这个空白是指不进样,但仍让液相完整的走完一个梯度程序吗?(比如上面的是70min)?

盼指教,谢谢

[ Last edited by tianhua on 2009-4-24 at 22:38 ]
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uliya809

木虫 (正式写手)

★ ★
opq691(金币+2):感谢应助
走等度也许是因为第3与4这个时间点的东西要用这个等度的条件才能很好的分离 而梯度是一个一直改变的过程 没有一个时间点的比例和另外一个相同(设了等度的除外)
    第60min, A:B=80:20(V /v),应该是为了平衡柱子以便于下一针进样
这两点我同意,但是第三点是不对的,应该进个空白样,首先是让柱子适应这个梯度,另外最重要的是确定柱子在走梯度是是否干净或则是否有污染,在0分钟的比例走到时候有些东西不一定能看到,所以必须走空白样!
3楼2009-04-25 09:03:24
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chenjiajiang198

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
opq691(金币+2):感谢应助
走等度也许是因为第3与4这个时间点的东西要用这个等度的条件才能很好的分离 而梯度是一个一直改变的过程 没有一个时间点的比例和另外一个相同(设了等度的除外)
    第60min, A:B=80:20(V /v),应该是为了平衡柱子以便于下一针进样
    个人觉得进样钱就走下最初的比列就是了 在这个比例下基线平稳了就可以运行程序开始进样了 因为梯度洗脱之前应该是用0分钟的比例的条件去平衡柱子
2楼2009-04-24 23:21:17
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chenjiajiang198

至尊木虫 (著名写手)

我指的只是针对LZ问的70min这个时间的问题 忘记回答第三个问题了 楼上的说的是正确的
4楼2009-04-29 22:30:03
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