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bioscience

铁杆木虫 (正式写手)

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[交流] 求助 HE染色的问题

心脏HE染色，细胞质总是染得很深，显微镜下呈深紫红色，而且细胞间边界不清楚，感觉沾着很多曙红染料颗粒的样子。
现在只在曙红中沾一下就拿出来，但没有用处。试图在苏木精染色后调整盐酸酒精分色的时间，但时间短了没有用，时间长了细胞核的颜色就都没了。
不知哪位遇到过类似情况，如何解决？

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1楼 2009-04-24 21:17:25

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savid888

木虫 (正式写手)

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这是非常正常的现象，开始做HE染色的时候都会碰到。
盐酸酒精分色是HE染色的关键步骤，染出的片子核浆边界是否清晰取决于分色的度，过则苏木精褪色太重，核浆边界不清晰；不足则达不到分色的目的。
建议：1. 盐酸酒精分色后在自来水中返蓝时间延长，或用稀氨水返蓝；2. 伊红可以过滤后使用，这样应该不会“感觉沾着很多曙红染料颗粒的样子”，并且伊红染色不需要太浓，只要最终封片时有淡淡的红色就可以了，这样的片子反而好看些。
个人愚见，请斟酌。

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2楼2009-04-24 23:29:03

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bioscience

铁杆木虫 (正式写手)

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谢谢建议
我采取的是0.25%氨水返蓝20s.
伊红原来采用的是0.5%浓度，后来觉得太浓，又稀释了四倍，染色时间1s.但细胞质仍然染得很深，封片时看组织就是很浓的红色。不过伊红的确没有过滤，我过滤后再试试看。
我就这个问题曾经和别的实验室的人交流过，但似乎没什么人遇到这个问题。在网上查找，好像也是抱怨细胞质染不上的，很少有说染得太深。

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3楼2009-04-25 13:03:15

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savid888

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呵呵，是的，别人都怕染不上（其原因多半是伊红染色后酒精脱水把伊红的颜色也褪了），你却抱怨染的太深
伊红有醇溶性的和水溶性的。实在不行的话就换种试试吧。

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4楼2009-04-25 16:12:46

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