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bioscience

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 求助 HE染色的问题

心脏HE染色,细胞质总是染得很深,显微镜下呈深紫红色,而且细胞间边界不清楚,感觉沾着很多曙红染料颗粒的样子。
现在只在曙红中沾一下就拿出来,但没有用处。试图在苏木精染色后调整盐酸酒精分色的时间,但时间短了没有用,时间长了细胞核的颜色就都没了。
不知哪位遇到过类似情况,如何解决?
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savid888

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+5,VIP+0):积极分享奖 4-25 00:56
这是非常正常的现象,开始做HE染色的时候都会碰到。
盐酸酒精分色是HE染色的关键步骤,染出的片子核浆边界是否清晰取决于分色的度,过则苏木精褪色太重,核浆边界不清晰;不足则达不到分色的目的。
建议:1. 盐酸酒精分色后在自来水中返蓝时间延长,或用稀氨水返蓝;2. 伊红可以过滤后使用,这样应该不会“感觉沾着很多曙红染料颗粒的样子”,并且伊红染色不需要太浓,只要最终封片时有淡淡的红色就可以了,这样的片子反而好看些。
个人愚见,请斟酌。
2楼2009-04-24 23:29:03
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bioscience

铁杆木虫 (正式写手)

谢谢建议
我采取的是0.25%氨水返蓝20s.
伊红原来采用的是0.5%浓度,后来觉得太浓,又稀释了四倍,染色时间1s.但细胞质仍然染得很深,封片时看组织就是很浓的红色。不过伊红的确没有过滤,我过滤后再试试看。
我就这个问题曾经和别的实验室的人交流过,但似乎没什么人遇到这个问题。在网上查找,好像也是抱怨细胞质染不上的,很少有说染得太深。
3楼2009-04-25 13:03:15
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savid888

木虫 (正式写手)

呵呵,是的,别人都怕染不上(其原因多半是伊红染色后酒精脱水把伊红的颜色也褪了),你却抱怨染的太深
伊红有醇溶性的和水溶性的。实在不行的话就换种试试吧。
4楼2009-04-25 16:12:46
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