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mjl3680

木虫 (小有名气)

[交流] sds-page测蛋白分子量准吗

如果测膜蛋白的分子量会有误差吗?
测出的分子量和MARKER比较,会出现少一半的现象吗?
有没有用SDS-PAGE测分子量比实际少一半的可能啊

[ Last edited by mjl3680 on 2009-4-27 at 08:10 ]
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极分享奖 4-25 00:49
很有可能
因为假如蛋白是二聚体,那么在SDS-PAGE中就会解开了~~表观分子量只会是完整蛋白的一半
2楼2009-04-24 11:35:48
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mjl3680

木虫 (小有名气)

不是二聚体,我表达的蛋白应该是60KD,可sds-page跑出来是30KD,我做的是融合表达,标签在N端,然后是疏水蛋白,再接着是绿色荧光蛋白,可以肯定的是标签和绿色荧光蛋白都有,原核还会跳跃表达吗?很多人说是sds-page可能测的不准,不知道谁遇到过这种情况
3楼2009-04-24 13:32:25
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极分享奖 4-25 00:49
就算SDS-PAGE误差再大也不会差一倍这么多。
4楼2009-04-24 15:48:15
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mjl3680

木虫 (小有名气)

是啊,我觉得SDS-PAGE 应该不会差太多,所以想请教我这种情况该怎么办,很多人都告诉我不会跳跃表达,如果这样就是降解,可降解怎么会这么彻底?纯化后只有很浓的一条带啊
5楼2009-04-24 16:27:29
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lifefamily

有二硫键?
你先不用tag纯化,用初提物后直接跑,拿纯化好的30K的做marker看看
6楼2009-04-27 09:38:42
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)

做个质谱就知道了
7楼2009-04-27 11:15:19
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mjl3680

木虫 (小有名气)

6楼的方法我试过了,也是30KD左右,7楼做质谱,是飞行质谱吗?在哪能做,价格大约多少呢
8楼2009-04-28 08:14:24
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