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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » sds-page测蛋白分子量准吗
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mjl3680

木虫 (小有名气)

[交流] sds-page测蛋白分子量准吗

如果测膜蛋白的分子量会有误差吗？
测出的分子量和MARKER比较，会出现少一半的现象吗？
有没有用SDS-PAGE测分子量比实际少一半的可能啊

[ Last edited by mjl3680 on 2009-4-27 at 08:10 ]
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1楼 2009-04-24 11:33:48
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极分享奖 4-25 00:49
很有可能
因为假如蛋白是二聚体，那么在SDS－PAGE中就会解开了~~表观分子量只会是完整蛋白的一半
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2楼2009-04-24 11:35:48
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mjl3680

木虫 (小有名气)
不是二聚体，我表达的蛋白应该是60KD,可sds-page跑出来是30KD,我做的是融合表达，标签在N端，然后是疏水蛋白，再接着是绿色荧光蛋白，可以肯定的是标签和绿色荧光蛋白都有，原核还会跳跃表达吗？很多人说是sds-page可能测的不准，不知道谁遇到过这种情况
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3楼2009-04-24 13:32:25
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Rubisco580

金虫 (小有名气)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极分享奖 4-25 00:49
就算SDS-PAGE误差再大也不会差一倍这么多。
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4楼2009-04-24 15:48:15
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mjl3680

木虫 (小有名气)
是啊，我觉得SDS-PAGE 应该不会差太多，所以想请教我这种情况该怎么办，很多人都告诉我不会跳跃表达，如果这样就是降解，可降解怎么会这么彻底？纯化后只有很浓的一条带啊
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5楼2009-04-24 16:27:29
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lifefamily

有二硫键？
你先不用tag纯化，用初提物后直接跑，拿纯化好的30K的做marker看看
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6楼2009-04-27 09:38:42
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
做个质谱就知道了
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7楼2009-04-27 11:15:19
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mjl3680

木虫 (小有名气)
6楼的方法我试过了，也是30KD左右，7楼做质谱，是飞行质谱吗？在哪能做，价格大约多少呢
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8楼2009-04-28 08:14:24
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