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littlepigpig金虫 (小有名气)
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[交流]
有人做luciferase assay的吗?请教
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请教大家一个问题 1. 用12孔板,细胞均匀平铺,85-90% 2. 转染 3. 加入诱导剂 4. 做luciferase assay 每次条件(细胞数,转染条件和时间,诱导剂量和luciferase的条件)都是一样的,操作,试剂,质粒(每种质粒都是同一次提的,跑胶看过,没什么问题)都一样,细胞是一代代传下来,10代开始做,到现在30多代 重复几次实验,但是结果不稳定,有什么原因呢? 打算下一步做western看看怎样解释实验结果。 谢谢。 [ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 13:15 ] |
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songfenzz
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5楼2009-04-27 22:26:01
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littlepigpig(金币+5,VIP+0):谢谢回复 4-24 12:38
littlepigpig(金币+5,VIP+0): 5-2 00:16
littlepigpig(金币+6,VIP+0): 5-5 07:42
littlepigpig(金币+5,VIP+0):谢谢回复 4-24 12:38
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littlepigpig(金币+6,VIP+0): 5-5 07:42
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你的样品和底物都要预先放在室温平衡一下。还有细胞裂解要充分,回收细胞裂解时,要防止交叉污染,不要溅到其他样品中。 关键是将内参和目的基因载体的比例调整好。 感觉转染这关很重要, rebaccapumc战友说的内参和目的基因载体的比例调整好值得重视. 细胞裂解我们一般在室温10分钟,感觉还可以. |
2楼2009-04-23 18:33:29
jiaminl
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3楼2009-04-24 08:07:21
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4楼2009-04-24 12:38:03













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