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littlepigpig金虫 (小有名气)
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[交流]
有人做luciferase assay的吗？请教
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请教大家一个问题 1. 用12孔板，细胞均匀平铺，85－90% 2. 转染 3. 加入诱导剂 4. 做luciferase assay 每次条件（细胞数，转染条件和时间，诱导剂量和luciferase的条件）都是一样的，操作，试剂，质粒（每种质粒都是同一次提的，跑胶看过，没什么问题）都一样，细胞是一代代传下来，10代开始做，到现在30多代 重复几次实验，但是结果不稳定，有什么原因呢？ 打算下一步做western看看怎样解释实验结果。 谢谢。 [ Last edited by 350784478 on 2009-9-19 at 13:15 ] |
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littlepigpig(金币+5,VIP+0):谢谢回复 4-24 12:38
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你的样品和底物都要预先放在室温平衡一下。还有细胞裂解要充分，回收细胞裂解时，要防止交叉污染，不要溅到其他样品中。 关键是将内参和目的基因载体的比例调整好。 感觉转染这关很重要, rebaccapumc战友说的内参和目的基因载体的比例调整好值得重视. 细胞裂解我们一般在室温10分钟,感觉还可以. |
2楼2009-04-23 18:33:29