| 查看: 1268 | 回复: 9 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
关于接合转移的问题
|
|||
| 我将构建好的质粒转化ET12567,然后用这个菌与东方拟无枝酸菌接合转移，但是现在接合转移做了好久，都没出现好的结果，年底就毕业了，很着急，有哪位接合转移方面的经验的，望指导一下，有没有什么好的建议，感激不尽了！ |
回复此楼» 猜你喜欢
电气专硕320求调剂
已经有5人回复
-
一志愿西北工业大学289 085602
已经有33人回复
-
一志愿哈工大 085600 277 12材科基求调剂
已经有24人回复
-
268分085602化学工程调剂
已经有28人回复
-
化学工程调剂289
已经有50人回复
-
求调剂，262机械专硕
已经有8人回复
-
305求调剂
已经有6人回复
-
327求调剂
已经有5人回复
-
347求调剂
已经有4人回复
-
272分材料子求调剂
已经有47人回复
3楼2009-04-23 15:35:05
|
我现在的问题是： 将构建好的一个质粒（大约8500bp)转化大肠杆菌ET12567,用的是CaCl2法制备ET12567感受态，菌液PCR验证、提取质粒酶切验证均正确，将验证正确的菌用20％甘油保存在－20度； 此时问题出现了：将甘油保藏管菌液重新接LB小试管（含抗性），提质粒，但是此时却见不到质粒的条带了，Why？（ps:提质粒用的试剂是别人刚刚提过质粒的，应该没问题；LB小试管菌长得很好很正常）。我也试过将甘油保藏管菌液先在LB（含同样抗生素）平板活化，然后再接小试管提质粒，结果电泳也没见到我所要的质粒条带（PS：电泳和别人一起跑的，别人的有条带，电泳应该是没问题的） 我的ET12567是RecA缺陷型的，现在和实验室的师兄师姐讨论了一下，不知道是不是因为安普抗生素的问题（安普抗生素固体粉末冻存在－20度的时间比较长了，有几年了吧，会不会是效价变低了呢？),但是我单独将ET12567接在含三种抗性的LB液体里面，是不长的，这到底是怎么回事呢？ |
2楼2009-04-23 13:06:03
jiaminl
铁杆木虫 (知名作家)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 7168.5
- 红花: 3
- 帖子: 8220
- 在线: 161.3小时
- 虫号: 663795
- 注册: 2008-11-27
- 专业: 药理学其他科学问题
4楼2009-04-24 08:17:02
5楼2009-04-24 13:37:32
