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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » RNase A 如何使用
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xhlxhl

木虫 (正式写手)

[交流] RNase A 如何使用

QIAGEN 的 RNase A
规格： 2.5 ml (100 mg/ml)
活性： 7000 units/ml
单位定义： 一个单位定义为在25°C、pH 5.0的条件下，催化水解RNA的一级反应速度常数为1.0时的RNase量


我提的基因组，有RNA 污染，测得DNA含量1ug/ul,体积 200ul，如何使用RNase A ，加的量和什么温度培养多长时间。
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1楼 2009-04-22 20:00:04
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humants

金虫 (正式写手)
我都是质粒提取完之后，加1微升 10min搞定
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5楼2009-04-25 09:24:31
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轻5飞扬

金虫 (正式写手)
★
xhlxhl(金币+1,VIP+0):谢谢热心的小虫虫 4-23 00:38
我们平时用的RNase A的工作浓度是20微克/ML? 记不太清楚了,总之母液要配成20mg/mL,用的时候1:1000加就OK,配完后要在开水里面煮十分钟去去除DNA酶,然后-20度保存就行了,用的时候1:1000加到你的DNA或是质粒中,37度处理大约两个小时RNA消化的情况就比较理想
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2楼2009-04-22 23:07:16
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Sarah_Shy

木虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极分享奖 4-25 00:54
其实用法没那么严格，我最近也用RNase A消化提取的DNA中的RNA。我用的酶和你一个浓度，我每次加1ul，消化1h左右，效果都很好的啊
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4楼2009-04-24 23:50:37
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
xhlxhl(金币+1,VIP+0):谢谢分享哦~~ 4-28 23:23
RNase中有迹量的DNase，使用前不处理的话，容易将基因组DNA切得乱七八糟（怎么个乱七八糟法没试验过），分子克隆上的配法是：将RNase A溶于10mmol/LTris cl（PH7.5），15mmol/L NaCl中，配成10mg/mL的浓度，于沸水中加热15min，缓慢冷却到室温，分装小份-20℃保存。
我处理的时候50ul基因组DNA（OD260/OD280=1.6~1.8）2ul 37℃处理1h效果就很好。
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Thank-you，so-blue.
6楼2009-04-25 10:22:57
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