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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 培养大肠杆菌过程中的困惑求助
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kkmonkey

荣誉版主 (著名写手)

小木虫食品研究中心前主任

[交流] 培养大肠杆菌过程中的困惑求助

现在做大肠杆菌的扩培，用的是LB培养基。别人论文中提到：接种菌液后，需要加入一定量的葡萄糖和乳糖，到一定浓度。
      请问：1，加葡萄糖和乳糖什么作用呢？
               2，加到的浓度是多少呢？葡萄糖和乳糖本身的浓度是多少？
     由于本人没有做过微生物相关的试验，现在硕士课题不得不做，很茫然，请高手指导，不甚感激！
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喜欢飞和跑的懒猪
1楼 2009-04-21 10:58:46
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anik

银虫 (正式写手)
1％（W/V）        Tryptone
                                                     0.5％（W/V）     Yeast Extract
                                                     1％（W/V）        NaCl
培养大肠杆菌不需要葡糖糖吧？
LB培养基就是用来培养大肠杆菌的。
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2楼2009-04-21 11:55:07
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
10g/L Tryptone
                                                     
5g/L   Yeast Extract
                                                     
10g/L      NaCl  

pH7.2灭菌即可。

加葡萄糖也可，要是你用pET质粒表达重组蛋白的话。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
3楼2009-04-21 12:23:44
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kkmonkey

荣誉版主 (著名写手)

小木虫食品研究中心前主任

谢谢啊

谢谢两位大侠的指点。那说明我参照的论文有问题。哈。不过问过一个老师，他说可以加乳糖，是什么促进剂？有这一说法吗？具体为什么加呢？
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喜欢飞和跑的懒猪
4楼2009-04-21 13:05:49
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)
单纯培养不用加葡萄糖和乳糖，配LB我都是用自来水，效果一样好，如果表达的话，建议还使用TM培养基，表达效果要好有一些，但也不是绝对的。
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5楼2009-04-21 13:54:43
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gastrodia

金虫 (正式写手)
通常在培养基中添加乳糖和葡萄糖是作为诱导表达的诱导子，你要看一下文章中所用的质粒上面有什么样的启动子
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6楼2009-04-21 14:22:48
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kkmonkey

荣誉版主 (著名写手)

小木虫食品研究中心前主任

太感谢了！

改天忙完了赠金币哦，嘿嘿
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喜欢飞和跑的懒猪
7楼2009-04-21 15:45:03
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lifefamily

加IPTG是诱导表达用的啊！
培养归培养，37°C摇上3、4个小时以后再加IPTG表达外源蛋白。
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8楼2009-04-21 16:56:23
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yuhan86

木虫 (小有名气)
★
sutao1979(金币+1,VIP+0):thanks 5-7 15:16
葡萄糖是用作培养基碳源和能源的，如果你希望获得较多菌体的话，可以适当加点碳源，但是葡萄糖的量太多，产生乙酸会抑制大肠杆菌的生长，因此也可以用甘油作碳源。葡萄糖是大肠杆菌最先利用的糖类，当培养基中没有其它糖类时，乳糖也可以作为碳源被大肠利用，如果你的大肠是工程菌，T7启动子的话，乳糖同时还可以作为诱导剂，诱导你的目的蛋白的表达。
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9楼2009-04-25 14:26:23
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yuhan86

木虫 (小有名气)
如果是LB培养基，不做Fedbatch培养，可以加0.25%葡萄糖
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10楼2009-04-25 14:31:04
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