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xiao_huo

木虫 (小有名气)

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[交流] 【关于Vc测定的疑惑，求解】+【有效期至2009年6月2日】

前一段做实验，用国标2，4-二硝基苯肼的方法作Vc的标准曲线。
   结果前三个浓度较小的点还可以。
   而加上后几个浓度大一的点一测（其吸光度基本上都一样），标准曲线就比较变态了，线性系数极差。
   我记得，实验中是用1%的草酸配的1%硫脲来定容标准系列得。由于后几个标准系列定容时，硫脲不够用，就直接拿2%的硫脲（1%的草酸配的2%硫脲）用蒸馏水稀释一倍后用了。还有，空白除了没加Vc之外，其它处理同标准加了Vc的标准系列一样。就这两步没按着国标来，感觉有点问题，但也不可能影响那么大吧！
   急求那位高手帮忙，并告知一下该实验的那些细节要特别注意的。是不是我们忽略了其它方面的问题。
国标方法如下：
   本实验用水均为蒸馏水，试剂纯度均为分析纯。
4.1 4.5mol/L硫酸：谨慎地加250ml硫酸（比重1.84）于700ml水中，冷却后用水稀释至1000ml。
4.2 85%硫酸：谨慎地加900ml硫酸（比重1.84）于100ml水中。
4.3 2%2，4-二硝基苯肼溶液：溶解2g 2，4-二硝基苯肼于100ml4.5mol/L硫酸内，过滤。不用时存于冰箱内，每次用前必须过滤。
4.4 2%草酸溶液：溶解20g草酸于700ml水中，稀释至1000ml。
4.5 1%草酸溶液：稀释500ml 2%草酸溶液到1000ml。
4.6 1%硫脲溶液：溶解5g硫脲于500ml 1%草酸溶液中。
4.7 2%硫脲溶液：溶解10g硫脲于500ml1%草酸溶液中。
4.8 1mol/L盐酸：取100ml盐酸，加入水中，并稀释至1200ml。
4.9 活性炭：将100g活性炭加到750ml 1mol/L盐酸中，回流1~2h，过滤，用水洗数次，至滤液中无铁离子（Fe3+）为止，然后置于110℃烘箱中烘干。
4.10 标准
（1）抗坏血酸标准溶液（1mg/ml）：溶解100mg纯抗坏血酸于100ml 1%草酸溶液中。
（2）标准曲线绘制
加1g活性炭于50ml标准溶液中，摇动1min，过滤。
取10ml滤液放入500ml容量瓶中，加5.0g硫脲，用1%草酸溶液稀释至刻度。抗坏血酸浓度为20μg/ml。
取5，10，20，25，40，50，60ml稀释液，分别放入7个100ml容量瓶中，用1%硫脲溶液稀释至刻度，使最后稀释液中抗坏血酸的浓度分别为1，2，4，5，8，10及12μg/ml。
成色反应操作如下：
呈色反应
5.3.1于三个试管中各加入4ml稀释液。一个试管作为空白，在其余试管中加入1.0ml 2%2，4-二硝基苯肼溶液，将所有试管放入37±0.5℃恒温箱或水浴中，保温3h。
5.3.2 3h后取出，除空白管外，将所有试管放入冰水中。空白管取出后使其冷到室温，然后加入1.0ml 2%2，4-二硝基苯肼溶液，在室温中放置10~15min后放入冰水内。其余步骤同样品。
5.3.3 85%硫酸处理：当试管放入冰水后，向每一试管中加入5ml85%硫酸，滴加时间至少需要1min，需边加边摇动试管。将试管自冰水中取出，在室温放置30min后比色。
5.3.4 比色：用1cm比色杯，以空白液调零点，于500nm波长测吸光值。

以吸光值为纵坐标，以抗坏血酸浓度（μg/ml）为横坐标绘制标准曲线。

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