| 查看: 440 | 回复: 3 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
dulei木虫 (小有名气)
|
[交流]
求助连接问题！！！
|
||
|
我用Xba I和Nde I双酶切质粒PIB139，小片段很小（10bp），直接用纯化试剂盒回收纯化大片段（6000bp左右）。 用Xba I和Nde I双酶切质粒pTA2-Vgb质粒（在T载体pTA2上连了一个vgb基因，酶切位点都有，测序正确），回收500bp左右的vgb片段。 然后将酶切后的PIB139和vgb片段连接，可是连接了好几次都没有连接上。连接体系应该没有问题，做其它基因连接时，都很好就连上了。 跑胶验证过程，发现：回收的vgb基因片段量非常少，不知道是不是这个原因。 切胶时发现vgb片段的量还是挺多的，可是回收后就很少很少了，跑胶5uL都很难看见条带。是不是因为vgb条带太短（500bp左右），损失太大的原因啊。 Nde I酶切效率很低，切开的位点连接效率也很低，我用的是长时间的连接（和平末端连接时间差不多，2个小时左右）。但是一个菌落都不长。 有没有人连接过Xba I和Nde I双酶切产物的，麻烦说明一下连接步骤，越详细越好。在此谢过！！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
今天系统多次维护，明天很可能放榜！
已经有5人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有74人回复
-
岩土工程学报什么时候才能终审完呐
已经有4人回复
-
时间戳又变了8-15
已经有25人回复
-
2027广东省杰青
已经有6人回复
-
快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。
已经有3人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有9人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有26人回复
-
我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人
已经有16人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有12人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
2楼2009-04-21 08:31:59
zhyzx
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1118.4
- 散金: 4
- 红花: 6
- 帖子: 295
- 在线: 34.4小时
- 虫号: 697243
- 注册: 2009-02-06
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2009-04-21 10:12:17
elvias
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 贵宾: 0.005
- 金币: 5850.5
- 红花: 7
- 帖子: 389
- 在线: 91.5小时
- 虫号: 302177
- 注册: 2006-12-02
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤免疫
4楼2009-04-21 13:10:41
