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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒，单双酶切电泳结果很奇怪？
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04swlcm

金虫 (小有名气)

[交流] 质粒，单双酶切电泳结果很奇怪？

大家好！
    我今天提的质粒（含pMD19-T vector 2700bp+目的基因1500bp，大小应该在4100bp左右，但跑出来条带在3000bp左右,怪了？之前我做过菌落PCR都跑出目的条带了的菌），我晚上根据自己设计的引物的酶切位点进行单（BglII）双（BglII和SphI）Sample Text酶切，结果，单酶切一条带，还稍微比质粒跑快了一点点，大小查不多在3000bp，奇怪！双酶切两条带，一条也在2800bp左右，一条在1300左右，感觉应该是连上了的啊？？
     恳求大家帮我分析一下，谢谢！
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1楼 2009-04-21 00:06:27
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xmchen1015

银虫 (小有名气)
从你的描述来看，你鉴定质粒大小时应该是用的Marker，Marker是线性的而你的质粒是环形的，所以你的质粒看起来小很多。建议你空载体做对照重新鉴定一下。
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2楼2009-04-21 16:06:42
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lifefamily

2楼方法可以一试
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3楼2009-04-21 16:51:38
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04swlcm

金虫 (小有名气)
谢谢啦~
很怪呢，我今天重提了质粒，结果好像又对了呢！送去测序了，等待结果……
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4楼2009-04-21 23:44:29
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
测序之前最好鉴定好质粒是百分百重组好的。
建议多提几组（我一般提10组）直接跑质粒比较大小，跑得慢的做双（单）酶切鉴定，或者以质粒为模板做pcr鉴定。
不过T应该很好连，似乎也不用这么麻烦。
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Thank-you，so-blue.
5楼2009-04-22 08:54:09
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20021239

银虫 (小有名气)
我也在做TA连接，跑电泳也不太正常，不过师兄师姐说质粒电泳结果不能反映真实大小，因为是环状而非线性的，最好做酶切后电泳，当然测序是最好的，也是必须的！
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http://www.jove.com/index/main.stp
6楼2009-04-22 22:58:16
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04swlcm

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 20021239 at 2009-4-22 22:58:
我也在做TA连接，跑电泳也不太正常，不过师兄师姐说质粒电泳结果不能反映真实大小，因为是环状而非线性的，最好做酶切后电泳，当然测序是最好的，也是必须的！

呵呵，就是哈，大家一起加油哦！有问题大家一起交流！
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7楼2009-04-23 00:05:31
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