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04swlcm

金虫 (小有名气)


[交流] 质粒,单双酶切电泳结果很奇怪?

大家好!
    我今天提的质粒(含pMD19-T vector 2700bp+目的基因1500bp,大小应该在4100bp左右,但跑出来条带在3000bp左右,怪了?之前我做过菌落PCR都跑出目的条带了的菌),我晚上根据自己设计的引物的酶切位点进行单(BglII)双(BglII和SphI)Sample Text酶切,结果,单酶切一条带,还稍微比质粒跑快了一点点,大小查不多在3000bp,奇怪!双酶切两条带,一条也在2800bp左右,一条在1300左右,感觉应该是连上了的啊??
     恳求大家帮我分析一下,谢谢!
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xmchen1015

银虫 (小有名气)

从你的描述来看,你鉴定质粒大小时应该是用的Marker,Marker是线性的而你的质粒是环形的,所以你的质粒看起来小很多。建议你空载体做对照重新鉴定一下。
2楼2009-04-21 16:06:42
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lifefamily

2楼方法可以一试
3楼2009-04-21 16:51:38
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04swlcm

金虫 (小有名气)


谢谢啦~
很怪呢,我今天重提了质粒,结果好像又对了呢!送去测序了,等待结果……
4楼2009-04-21 23:44:29
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

测序之前最好鉴定好质粒是百分百重组好的。
建议多提几组(我一般提10组)直接跑质粒比较大小,跑得慢的做双(单)酶切鉴定,或者以质粒为模板做pcr鉴定。
不过T应该很好连,似乎也不用这么麻烦。
Thank-you,so-blue.
5楼2009-04-22 08:54:09
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20021239

银虫 (小有名气)

我也在做TA连接,跑电泳也不太正常,不过师兄师姐说质粒电泳结果不能反映真实大小,因为是环状而非线性的,最好做酶切后电泳,当然测序是最好的,也是必须的!
http://www.jove.com/index/main.stp
6楼2009-04-22 22:58:16
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04swlcm

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 20021239 at 2009-4-22 22:58:
我也在做TA连接,跑电泳也不太正常,不过师兄师姐说质粒电泳结果不能反映真实大小,因为是环状而非线性的,最好做酶切后电泳,当然测序是最好的,也是必须的!

呵呵,就是哈,大家一起加油哦!有问题大家一起交流!
7楼2009-04-23 00:05:31
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