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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白沉淀
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zlp322

铜虫 (初入文坛)

[交流] 蛋白沉淀

最近用酵母分泌表达7.9KD的蛋白,培养上清中的蛋白直接电泳怕看不到,因此想将上清中的蛋白浓缩,文献看到有三氯乙酸沉淀法、硫酸铵沉淀法、乙醇法、丙酮法。不知道哪种方法效果比较好。
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1楼 2009-04-20 22:55:09
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crystaler_

金虫 (正式写手)
★
zlp322(金币+1,VIP+0):积极参与 4-21 08:51
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2楼2009-04-20 23:35:50
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ghostsmall

木虫 (著名写手)
★
zlp322(金币+1,VIP+0):硫酸铵法效果怎么样啊，能谈谈吗？ 4-21 08:56
建议先用硫酸铵沉淀法试试。
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3楼2009-04-21 01:02:34
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
zlp322(金币+1,VIP+0):我做的时候ＴＣＡ产生的沉淀溶解性不好，不知道该怎么办？ 4-21 08:54
跑电泳的话TCA是最好的：效率高而且可以除去盐
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4楼2009-04-21 08:42:52
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蓝色基因

金虫 (正式写手)
★
zlp322(金币+1,VIP+0):具体的方法能谈谈吗？ 4-21 21:02
用过丙酮沉淀，感觉效果还可以。
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5楼2009-04-21 09:05:34
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

看这里

★
zlp322(金币+1,VIP+0):试试看，谢谢！ 4-21 20:59
你若只是跑SDS-PAGE，建议用最简单的方法！

即低pH沉淀法：用盐酸将上清液40 ml 调到pH 1-3，几乎可沉淀所有蛋白，然后高速离心30min， 弃去上清，用NaOH （100 mM）1 mL 将沉淀溶解，最终再将溶液的pH调到中性！
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
6楼2009-04-21 09:11:20
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我是我2082

木虫 (职业作家)
★
zlp322(金币+1,VIP+0):硫酸铵沉淀好像要蛋白量比较高，酵母表达蛋白酶降解的很利害，我怕很难沉淀下来。 4-21 20:59
自我感觉  硫酸铵沉淀法  好
丙酮，乙醇都会使蛋白质变性，至于三氯乙酸不是很了解
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7楼2009-04-21 09:12:54
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★
zlp322(金币+1,VIP+0):大概是什么样的体系呢？ 4-21 21:01
一般植物总蛋白经常用acetone（丙酮）沉淀，感觉也可以，你可以试试
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会当凌绝顶，一览众山小
8楼2009-04-21 15:05:14
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★
zlp322(金币+1,VIP+0):谢谢！ 4-23 10:50
1：4的体积，丙酮四倍体积，样品一倍
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会当凌绝顶，一览众山小
9楼2009-04-22 01:01:41
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