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关于硅胶柱和sephades LH-20的问题
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1、过硅胶柱时通过薄层选择洗脱剂，Rf值要相差多少才能在柱子里分开？（我看了几个帖子，一般说是Rf值0.2以上就能分开，我想问的是，比如薄层板上有5个点，点于点之间的Rf值相差要多少才能分开，还是Rf值在0.2以上的在柱子里都能分开？） 2、文献上写“石油醚：醋酸乙酯( 100∶0～50∶50) →氯仿：甲醇( 100∶2～50∶50)梯度洗脱,得到15 个组分( Fr. 1~Fr. 15) 。”这个“100∶0～50∶50“是根据什么设定的，到什么程度要换个梯度？我只知道他刚开始用石油醚洗脱，后面我就不知道要怎么做了。。。 3、上sephades LH-20柱的样品量大概要多少？我的样品在薄层板上的点太多，不能上sephades LH-20，请问要怎么处理？ PS：本人是新手，问题比较多，大家不要见笑！ |
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4楼2009-04-23 15:27:16
pal2004
木虫 (正式写手)
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karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教！ 4-22 23:36
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教！ 4-22 23:36
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首先要明白，不同物质通过硅胶柱分离，不仅要求在薄层上Rf一般相差0.2以上，还要最好把Rf值控制在0.3以下，如果两个物质的Rf值分别为0.6和0.8，除非你降低洗脱剂的强度，否则肯定无法分开，因为柱子相当于一个多次爬板的状态，Rf越大，洗脱的越快，分离效果越不好。 你待分离的点较多的话，几乎很难找到一个单一条件把它们一一分开，所以要用梯度。 变梯度从极性最小的溶剂（一般石油醚）开始洗脱，开始的时候梯度变得细点，比如100：0、100：1、50：1...到50:50洗脱完，石油醚：醋酸乙酯的极性范围以及不能把柱子上的物质洗脱了，所以要换氯仿：甲醇。 |
3楼2009-04-22 17:24:56
5楼2009-04-23 15:29:47