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xiaorong-er金虫 (正式写手)
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[交流]
询问怎么做未知物种某个已知酶的mRNA表达
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| 我现在想做一个酶的mRNA表达情况，但是这个物种的cDNA序列没有报道，我该怎么做？是不是根据人和鼠的保守区设计引物，挑选合适的引物和退火温度进行PCR扩增，扩增产物测序后根据测序序列进行引物设计，再挑选合适的引物和退火温度进行PCR扩增就可以了？ |
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2楼2009-04-20 09:39:00
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5楼2009-04-20 15:48:32
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xiaorong-er(金币+1,VIP+0): 4-21 08:21
xiaorong-er(金币+1,VIP+0): 4-21 08:21
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你把用非特异性引物扩出的条带大小在你估计的范围内的送去测序，序列出来后Blast看一下是否确实是你的目的基因扩出来的序列，如果是再根据已知序列重新设计引物，此时目的条带200bp就可以了，用新设计的引物进行定量或半定量的实验。 如何知道目的片段的大小，设计兼并性引物（非特异性引物时）你看看在相似基因上从上游引物到下游引物究竟有多少BP就可以粗略估计你的目的片段大小， 相似基因上碱基有差异，但是序列长度不会相差太大。 [ Last edited by gastrodia on 2009-4-20 at 18:36 ] |
6楼2009-04-20 18:34:30