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挥汗如雨至尊木虫 (职业作家)
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[交流]
PCR产物浓度测定问题
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请问PCR产物经乙醇沉淀后测定260 nm处的OD值的做法合理吗？乙醇沉淀能否去除剩余的dNTP和引物？如果去除不了，剩余的dNTP和引物对测定的OD值是不是影响很大？这样测出的PCR产物浓度应该偏大吧？如果利用过柱纯化的方法是否能去除剩余的dNTP和引物？ （乙醇沉淀方法：PCR结束后，加入0.1倍体积醋酸钠（3M，Ph5.2）和2.5倍体积的无水乙醇，冰浴10 min，12000 rpm离心10 min；轻轻倒掉上清，再加500 μl 75%乙醇洗涤。4℃，7500 rpm离心5 min，再倒掉上清，干燥沉淀；加入无菌水溶解纯化的PCR产物，紫外分光光度计测定260 nm处的吸光度，计算反应产物浓度） |
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