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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 新手求助：高效液相相关的！
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Daisy3382

金虫 (小有名气)

[交流] 新手求助：高效液相相关的！

我是一名新手，最近一直在做高效液相，完全自己在摸索，在使用的过程中有些地方有疑问，想请各位大侠们帮帮忙给点意见哈！问题如下：
1.我用的0.2molL的磷酸二氢钾缓冲液，浓度是不是很大能？听说浓度大了对柱子损伤比较大，而且使用的过程中在有些阀的部位都会有结晶。
2.用了缓冲液以后是要用水冲洗的吧？我用的是C18的柱子，长时间用水冲洗会不会对柱子有很大伤害啊？用什么洗比较好呢？
3.有个很奇怪的现象，明明缓冲液在ph＝3.75的时候峰有分但不很开，为了峰分的更好一些，我将缓冲液的ph调节了，用了ph＝5的缓冲液，分不开峰，然后再用3.75的缓冲液峰也分不开了，很不明白！
各位，指教指教啊！先谢过啦！
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1楼 2009-04-17 10:24:24
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Daisy3382

金虫 (小有名气)
在线等啊！
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2楼2009-04-17 10:24:49
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yokoito

银虫 (小有名气)
★
chiraler(金币+1):感谢参与讨论
1.蛮大的，不过你做之前，先将有机相和缓冲盐倒在一起，看会不会混浊的现象，我一般用0.05的；久了会结晶，只要用完冲洗就好了，
2.一般用10%甲醇1ml/min先冲一个小时，再换甲醇就可以了，具体看情况；网上有很多详细说明，柱子说明书上也应该有的
3.是不是你跟换了流动相后没有平衡好？
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3楼2009-04-17 11:57:11
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Doww

★
chiraler(金币+1):感谢参与讨论
楼上意见很对。
缓冲溶液的平衡时间巨慢。
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4楼2009-04-17 13:24:36
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gleyi2005

金虫 (小有名气)
★
chiraler(金币+1):感谢参与讨论
0.2mol/L的浓度是相当的大了,一般最多0.05mol/L,水冲洗的话20倍的柱体积就差不多了
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5楼2009-04-17 14:04:28
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yujun523

银虫 (小有名气)
★
chiraler(金币+1):感谢参与讨论
是很大  一般用0.05MOL/L的    用10%的甲醇水冲洗  
调节PH值可以增加组分在固定相上的的保留时间并改善峰形  你的样品是弱酸吗
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6楼2009-04-17 19:30:09
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fang1828

铜虫 (初入文坛)
★
jsys(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论 4-18 08:11
含盐流动相至少以5%甲醇水溶液洗60min以上，再逐步更换成到纯甲醇清洗
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7楼2009-04-17 21:33:42
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j115090587

金虫 (正式写手)
★
opq691(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论 4-18 13:16
经常冲洗很重要，仪器用热水冲，柱子用10%甲醇冲吧
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8楼2009-04-18 09:02:45
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haotian3688

引用回帖:
Originally posted by Daisy3382 at 2009-4-17 10:24:
我是一名新手，最近一直在做高效液相，完全自己在摸索，在使用的过程中有些地方有疑问，想请各位大侠们帮帮忙给点意见哈！问题如下：
1.我用的0.2molL的磷酸二氢钾缓冲液，浓度是不是很大能？听说浓度大了对柱子 ...

最好用10％的甲醇－水冲柱子，纯水容易把柱子填料冲塌了。
0.2M的磷酸盐浓度是大了点，我才用0.05M的。不过这个也要看实验情况。
分离度不只跟pH有关。你那个换回来后又分不开了，很可能是柱效下降了。用纯有机溶剂小流速冲柱子几个小时试试看。
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9楼2009-04-20 21:05:39
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