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Daisy3382

金虫 (小有名气)

[交流] 新手求助:高效液相相关的!

我是一名新手,最近一直在做高效液相,完全自己在摸索,在使用的过程中有些地方有疑问,想请各位大侠们帮帮忙给点意见哈!问题如下:
1.我用的0.2molL的磷酸二氢钾缓冲液,浓度是不是很大能?听说浓度大了对柱子损伤比较大,而且使用的过程中在有些阀的部位都会有结晶。
2.用了缓冲液以后是要用水冲洗的吧?我用的是C18的柱子,长时间用水冲洗会不会对柱子有很大伤害啊?用什么洗比较好呢?
3.有个很奇怪的现象,明明缓冲液在ph=3.75的时候峰有分但不很开,为了峰分的更好一些,我将缓冲液的ph调节了,用了ph=5的缓冲液,分不开峰,然后再用3.75的缓冲液峰也分不开了,很不明白!
各位,指教指教啊!先谢过啦!
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haotian3688

引用回帖:
Originally posted by Daisy3382 at 2009-4-17 10:24:
我是一名新手,最近一直在做高效液相,完全自己在摸索,在使用的过程中有些地方有疑问,想请各位大侠们帮帮忙给点意见哈!问题如下:
1.我用的0.2molL的磷酸二氢钾缓冲液,浓度是不是很大能?听说浓度大了对柱子 ...

最好用10%的甲醇-水冲柱子,纯水容易把柱子填料冲塌了。
0.2M的磷酸盐浓度是大了点,我才用0.05M的。不过这个也要看实验情况。
分离度不只跟pH有关。你那个换回来后又分不开了,很可能是柱效下降了。用纯有机溶剂小流速冲柱子几个小时试试看。
9楼2009-04-20 21:05:39
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查看全部 9 个回答

yokoito

银虫 (小有名气)


chiraler(金币+1):感谢参与讨论
1.蛮大的,不过你做之前,先将有机相和缓冲盐倒在一起,看会不会混浊的现象,我一般用0.05的;久了会结晶,只要用完冲洗就好了,
2.一般用10%甲醇1ml/min先冲一个小时,再换甲醇就可以了,具体看情况;网上有很多详细说明,柱子说明书上也应该有的
3.是不是你跟换了流动相后没有平衡好?
3楼2009-04-17 11:57:11
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Doww


chiraler(金币+1):感谢参与讨论
楼上意见很对。
缓冲溶液的平衡时间巨慢。
4楼2009-04-17 13:24:36
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gleyi2005

金虫 (小有名气)


chiraler(金币+1):感谢参与讨论
0.2mol/L的浓度是相当的大了,一般最多0.05mol/L,水冲洗的话20倍的柱体积就差不多了
5楼2009-04-17 14:04:28
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