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dcb005金虫 (著名写手)
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[交流]
西红柿 成熟果实RNA提取
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| 前段时间用trizol 法提取西红柿成熟果实RNA，结果没有提出来，提了好多次都没有，不知道为什么？并且有大量的白色胶状沉淀。虫友们有没有好的提取果实RNA的方法？ |
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2楼2009-04-15 11:05:46
yuegh
铁杆木虫 (职业作家)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 18278.5
- 散金: 21
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- 在线: 180.1小时
- 虫号: 132145
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- 专业: 凝聚态物性 II ：电子结构
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RNA比DNA容易降解多了,确定那是RNA吗 CTAB可以用于从大量产生粘多糖的有机体如植物以及某些革兰氏阴性菌（包括E.coli的某些株）中制备纯化DNA 。 个人认为在第一步加入蛋白酶K时可同时加入RNase 以降解RNA CTAB法原理 CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。 CTAB提取缓冲液的经典配方 Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏； EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性； NaCl 提供一个高盐环境，使DNA充分溶解，在于液相中； CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离； β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除 PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。 用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。 |
3楼2009-04-15 11:10:10