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Eileen1984

金虫 (职业作家)

[交流] 请教琼脂糖凝胶电泳的问题

最近在做某多糖的琼脂糖凝胶电泳，请有经验者指教上样缓冲液的配置
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1楼 2009-04-14 20:34:35
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放羊的小星星

木虫 (小有名气)
★ ★
Eileen1984(金币+1,VIP+0):很详细 4-22 12:27
Eileen1984(金币+1,VIP+0):谢谢 5-4 16:26
实际工作中常用的缓冲液配制见表


a.TBE浓储存液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温条件下用玻璃瓶保存5X溶液，出现沉淀后则予以废弃。以往都以lX作为使用液(即1：5稀释浓储存液)进行琼脂糖凝胶电泳。但0．5X的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖凝胶电泳都以1：10稀释的储存液作为使用液。进行聚丙烯酰胺凝胶电泳使用的lXTBE，是琼脂糖凝胶电泳时使用液浓度的2倍。聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1XTBE以提供足够的缓冲容量

    b.碱性电泳缓冲液应现用现配

    在配制缓冲液时，不论哪一种都需要加适量的EDTA，以除去2价金属离子。另外，硼酸与琼脂糖易形成复合物，使凝胶带负电荷，可能会吸附带正电荷的物质
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3楼2009-04-17 14:50:40
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jiaminl

铁杆木虫 (知名作家)
★
Eileen1984(金币+1,VIP+0):谢谢 5-4 16:26
不知道你指的是loading buffer还是电泳用的溶液了
loading buffer你买试剂的时候都有送的 啊
电泳用的溶液就是先配呈50倍TAE 就可以了
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Nevergiveup!
2楼2009-04-14 20:47:50
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jian52166

金虫 (小有名气)
★
Eileen1984(金币+1,VIP+0):谢谢 5-4 16:26
一楼的朋友也问过了，你说的是指loading buffer还是跑胶的时候用的缓冲液呢？如果是跑胶的时候用的缓冲液那二楼朋友给的资料就挺全的，你可以配50xTAE或者50xTBE，用的时候直接稀释成一倍的用就可以了。
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做无聊的事，但不是无聊的人
4楼2009-04-29 22:06:08
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lhliu2087

银虫 (著名写手)
★
Eileen1984(金币+1,VIP+0):谢谢 5-4 16:26
Loading buffer直接去买啦，35块一大瓶；TAE,TBE可以按网上很多的指引来配
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5楼2009-05-01 18:06:37
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