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淡然微笑23

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助:用构建的流感病毒NA质粒进行转染后能不能检测到神经氨酸酶活性呢? 已有1人参与

求助:用构建的流感病毒NA质粒进行转染后能不能检测到神经氨酸酶活性呢?

尝试用转染后的上清和细胞都没有检测出来神经氨酸酶活性,不知道是没有,还是操作出了问题,有没有做过相关实验的小伙伴呐?

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snoopytbw

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
假病毒还是灭活病毒啊

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2楼2018-11-10 07:10:38
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snoopytbw

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转染验证做了没,检测用的什么方法,NA用的是文献里的么?我估计转染有问题,什么细胞系

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3楼2018-11-10 07:12:03
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淡然微笑23

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by snoopytbw at 2018-11-10 07:10:38
假病毒还是灭活病毒啊

用的H9N2流感病毒NA的质粒

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4楼2018-11-10 08:34:45
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淡然微笑23

新虫 (初入文坛)

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3楼: Originally posted by snoopytbw at 2018-11-10 07:12:03
转染验证做了没,检测用的什么方法,NA用的是文献里的么?我估计转染有问题,什么细胞系

检测用的碧云天神经氨酸酶试剂盒,用PEI瞬转的293t细胞,想确定下质粒瞬转能检测到神经氨酸酶活性吗?

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5楼2018-11-10 08:36:31
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snoopytbw

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
细胞应该没问题,转染验证没,荧光还是PCR啊

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6楼2018-11-10 08:44:49
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淡然微笑23

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by snoopytbw at 2018-11-10 08:44:49
细胞应该没问题,转染验证没,荧光还是PCR啊

转染后用western验证过的,没有问题

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7楼2018-11-10 08:52:37
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snoopytbw

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因为神经氨酸是有差异的,你最好问问碧云天,那款试剂盒可以检测H9N2么,说不定是这个原因

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8楼2018-11-10 08:56:14
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淡然微笑23

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by snoopytbw at 2018-11-10 08:56:14
因为神经氨酸是有差异的,你最好问问碧云天,那款试剂盒可以检测H9N2么,说不定是这个原因

说明书上有写可以检测流感病毒的神经氨酸酶活性,而且我用病毒尿囊液去做是能检测到的,所以最想确定下质粒转染后是否还具有酶活性,如果有,是存在于上清还是细胞中?

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9楼2018-11-10 08:59:12
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snoopytbw

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
应该有的呀,有点奇怪

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10楼2018-11-10 09:02:21
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