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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 病原/病毒 » 求助:用构建的流感病毒NA质粒进行转染后能不能检测到神经氨酸酶活性呢？
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淡然微笑23

新虫 (初入文坛)
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10楼: Originally posted by snoopytbw at 2018-11-10 09:02:21
应该有的呀，有点奇怪

那你们检测的话，是取转染后的上清超离获取沉淀去检测吗？

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11楼2018-11-10 09:04:11
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snoopytbw

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9楼: Originally posted by 淡然微笑23 at 2018-11-10 08:59:12
说明书上有写可以检测流感病毒的神经氨酸酶活性，而且我用病毒尿囊液去做是能检测到的，所以最想确定下质粒转染后是否还具有酶活性，如果有，是存在于上清还是细胞中？
...

可能原因还是出在NA质粒上，是穿梭么

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12楼2018-11-10 09:05:26
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淡然微笑23

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12楼: Originally posted by snoopytbw at 2018-11-10 09:05:26
可能原因还是出在NA质粒上，是穿梭么
...

不是，用的带flag标签的一个真核表达载体构建的

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13楼2018-11-10 09:07:48
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snoopytbw

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我们只做活病毒，病毒载体用的是别人构建好的，跟你一样的方法呀，我怀疑还是质粒有问题，是不是表达量太低，密码子没优化，等等等一些原因哦，你得再看看质粒

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14楼2018-11-10 09:08:07
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淡然微笑23

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14楼: Originally posted by snoopytbw at 2018-11-10 09:08:07
我们只做活病毒，病毒载体用的是别人构建好的，跟你一样的方法呀，我怀疑还是质粒有问题，是不是表达量太低，密码子没优化，等等等一些原因哦，你得再看看质粒

能不能简单讲下你的操作流程啊，重复了3遍都不行，感觉很崩溃，去超离总是离不出来东西，总觉得还是哪步操作出了问题…

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15楼2018-11-10 09:11:20
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snoopytbw

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我们只做活病毒呀，载体法我没亲自做个，看人家做过

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16楼2018-11-10 09:19:16
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淡然微笑23

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16楼: Originally posted by snoopytbw at 2018-11-10 09:19:16
我们只做活病毒呀，载体法我没亲自做个，看人家做过

就是说你们也是用活病毒去检测酶活性的，是吗？其实我主要就是想确定下用质粒转染去做这个方法可不可行，谢谢你啦

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17楼2018-11-10 09:25:24
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snoopytbw

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17楼: Originally posted by 淡然微笑23 at 2018-11-10 09:25:24
就是说你们也是用活病毒去检测酶活性的，是吗？其实我主要就是想确定下用质粒转染去做这个方法可不可行，谢谢你啦
...

我们只做基因水平的，我觉得你这个情况，需要评估下载体是否可以稳定表达，原因比较多，一点点筛吧，有时候往往都是特别小的一点错了，沉下心找找

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18楼2018-11-10 15:29:08
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淡然微笑23

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18楼: Originally posted by snoopytbw at 2018-11-10 15:29:08
我们只做基因水平的，我觉得你这个情况，需要评估下载体是否可以稳定表达，原因比较多，一点点筛吧，有时候往往都是特别小的一点错了，沉下心找找
...

嗯嗯，谢谢您啦

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19楼2018-11-10 22:49:32
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