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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助:酶制剂失活的问题
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zdo82

金虫 (正式写手)

[交流] 求助:酶制剂失活的问题

最近做关于pH对酶活影响的实验,发现了奇怪的现象.这种酶的pH范围在4-8,最适pH在7.0左右,调pH至9.0,酶活变化不大,再加酸把pH调回7.0,出现大量沉淀,酶大量失活,小弟百思不得其解,哪位大哥能告诉我为什么会出现这种情况啊?
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1楼 2009-04-14 10:05:02
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远航2007

银虫 (小有名气)
★
zdo82(金币+1,VIP+0): 4-14 11:06
我觉得首先要知道这种酶得结构吧，之后才能分析现象及原因，
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2楼2009-04-14 10:12:16
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★
zdo82(金币+1,VIP+0): 4-14 11:06
酶是纯品吗？什么缓冲体系？
有可能酶只是发生了共沉淀，但并未失活
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3楼2009-04-14 10:35:18
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
zdo82(金币+1,VIP+0): 4-14 11:06
你首先考虑盐离子强度，这么加酸碱调来调去，离子强度已经不一样了
此时的变量不仅仅是pH而已

第二，调pH时是否过于剧烈，如果变化太快，可能引起蛋白质构象的变化，如果无法正确变化，那么就会发生沉淀
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4楼2009-04-14 10:39:58
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wanghao2900

银虫 (小有名气)
★
zdo82(金币+1,VIP+0): 4-14 11:06
很可能酶的结构在你回调的过程中被破坏了，蛋白质到达等电点沉淀下来了
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5楼2009-04-14 10:54:34
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zdo82

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-4-14 10:39:
你首先考虑盐离子强度，这么加酸碱调来调去，离子强度已经不一样了
此时的变量不仅仅是pH而已

第二，调pH时是否过于剧烈，如果变化太快，可能引起蛋白质构象的变化，如果无法正确变化，那么就会发生沉淀

调pH的过程应该没什么问题,因为开始调和回调都是逐滴加入的,要有问题,开始调到9就该有影响了.因为该酶在复配过程中是加入Nacl作为稳定剂的,所以盐离子应该对酶活影响不会太大啊
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6楼2009-04-14 11:12:31
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