24小时热门版块排行榜    

查看: 119  |  回复: 2
当前主题已经存档。

Anna2008

新虫 (初入文坛)

[交流] 请大家帮我看看PCR的DNA模板是否不纯,该怎么办?

各位虫友:
     大家好!
     在下做PCR上遇到苦难了,希望有高手可以帮我解答一下,下面我就讲一下具体问题:
     目前在PCR的反应体系和反应条件完全一致的情况下,一批样品中就只有一个样品不管怎样都p不出来,其余能够成功p出,所以我认为是模板的原因。
     DNA模板用0.8%琼脂糖凝胶电泳检验,比较亮,经A260测得浓度为78ug/ml,A260/A280=1.98,A320=0.034(20倍稀释后)。
     请问模板有什么问题吗?如果核酸不纯,对PCR影响这么大么?要对模板怎样进一步处理才行?
    注:模板添加量为2.5ul(50ul反应体系),是不是太高了?
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

grxx_wj

模板浓度过高 是P不出的
2楼2009-04-14 13:04:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

馨er

木虫 (著名写手)

儿科主任医师

我觉得你应该试换一下退火温度,或者增加镁的浓度看看!你的DNA浓度也不是很大,我们实验室有用过比你浓度大的也P出来结果了!
宠辱不惊闲观庭前花开花落,去留无意漫随天外云卷云舒
3楼2009-04-14 15:27:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Anna2008 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +3 芦lty 2026-03-25 4/200 2026-03-25 23:25 by 芦lty
[考研] 材料学硕333求调剂 +4 北道巷 2026-03-24 4/200 2026-03-25 14:16 by mapenggao
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 271求调剂 +4 生如夏花… 2026-03-22 4/200 2026-03-25 11:25 by userper
[考研] 299求调剂 +7 shxchem 2026-03-20 9/450 2026-03-25 10:41 by lbsjt
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 300求调剂,材料科学英一数二 +5 leaflight 2026-03-24 5/250 2026-03-24 16:25 by laoshidan
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工 264分各科过A区国家线 +3 哈哈157349 2026-03-21 3/150 2026-03-24 14:11 by zhyzzh
[考研] 305分求调剂(食品工程) +5 Sxy112 2026-03-21 7/350 2026-03-24 12:27 by 544594351
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +7 vv迷 2026-03-22 7/350 2026-03-23 23:44 by Txy@872106
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 一志愿华中农业071010,总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 一志愿深大,0703化学,总分302,求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见