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Anna2008

新虫 (初入文坛)

[交流] 请大家帮我看看PCR的DNA模板是否不纯,该怎么办?

各位虫友:
     大家好!
     在下做PCR上遇到苦难了,希望有高手可以帮我解答一下,下面我就讲一下具体问题:
     目前在PCR的反应体系和反应条件完全一致的情况下,一批样品中就只有一个样品不管怎样都p不出来,其余能够成功p出,所以我认为是模板的原因。
     DNA模板用0.8%琼脂糖凝胶电泳检验,比较亮,经A260测得浓度为78ug/ml,A260/A280=1.98,A320=0.034(20倍稀释后)。
     请问模板有什么问题吗?如果核酸不纯,对PCR影响这么大么?要对模板怎样进一步处理才行?
    注:模板添加量为2.5ul(50ul反应体系),是不是太高了?
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grxx_wj

模板浓度过高 是P不出的
2楼2009-04-14 13:04:08
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馨er

木虫 (著名写手)

儿科主任医师

我觉得你应该试换一下退火温度,或者增加镁的浓度看看!你的DNA浓度也不是很大,我们实验室有用过比你浓度大的也P出来结果了!
宠辱不惊闲观庭前花开花落,去留无意漫随天外云卷云舒
3楼2009-04-14 15:27:38
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