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Anna2008

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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帖子: 7
在线: 1.1小时
虫号: 739505
注册: 2009-04-03
专业: 环境工程

[交流] 请大家帮我看看PCR的DNA模板是否不纯，该怎么办？

各位虫友：
   大家好！
   在下做PCR上遇到苦难了，希望有高手可以帮我解答一下，下面我就讲一下具体问题：
   目前在PCR的反应体系和反应条件完全一致的情况下，一批样品中就只有一个样品不管怎样都p不出来，其余能够成功p出，所以我认为是模板的原因。
   DNA模板用0.8%琼脂糖凝胶电泳检验，比较亮，经A260测得浓度为78ug/ml，A260/A280=1.98，A320=0.034（20倍稀释后）。
   请问模板有什么问题吗？如果核酸不纯，对PCR影响这么大么？要对模板怎样进一步处理才行？
注：模板添加量为2.5ul（50ul反应体系），是不是太高了？

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