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浅析间皮瘤细胞裸鼠成瘤实验的建立 已有1人参与
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间皮瘤是一种少见的恶性肿瘤，其预后差，诊断和治疗都较为困难，采用大鼠和裸鼠建立动物实验模型进行研究，有望探寻其发病机制和诊疗方法。有研究表明C2－ceramide在体内、外均可抑制恶性间皮瘤细胞增殖、侵袭，诱导间皮瘤细胞凋亡。因此进行间皮瘤细胞裸鼠成瘤实验，并将C2－神经酰胺(C2-ceramide)作用于动物体内，为观察和检测C2－神经酰胺对原位间皮瘤和间皮瘤细胞的影响及机制提供基础。 恶性间皮瘤指来源于间质的所有的恶性弥散性原发肿瘤，包括间皮细胞或成纤维细胞样的部分间皮细胞。恶性间皮瘤最常见的原发部位为胸膜，其次为腹膜、心包膜及生殖系统。其病因学比较复杂，确切致病原因尚不完全清楚，恶性间皮瘤常见的致病因素为石棉，主要为闪石棉。采用恶性间皮瘤动物模型进行研究有望从动物水平认识间皮瘤的发生和发展，为预防、诊治间皮瘤奠定基础。裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。临床前CRO公司美迪西的药理学服务可以为客户提供裸鼠成瘤、裸鼠皮下成瘤等试验来进行医药方面的研究。 恶性间皮瘤裸鼠成瘤实验可以采用的瘤源为诱发鼠的肿瘤组织或细胞株，也可以是人间皮瘤肿瘤组织或细胞株，可以采用皮下移植和腹腔抑制建立肿瘤动物模型。 1、皮下移植瘤裸鼠成瘤实验 无菌条件下取雌性BALB/C裸鼠32 只，4-6周龄，体重18-21g。随机分为4组:C2－神经酰胺(C2-ceramide) 腹腔注射组( intraperitoneal，IP) 8 只、C2-ceramide皮下注射组(direct tumor，DT)8 只、DMSO对照组8只、生理盐水对照组8只。让实验动物适应实验室环境5日后开始注射肿瘤细胞，将制好的细胞悬液的最终浓度定为1.8×106 /ml。无菌条件下，于裸鼠右下背部皮下接种细胞悬液300μl，含间皮瘤细胞5×106。正常饲养，于接种后第7天开始给药。 （1）C2－ceramide腹腔注射组:腹腔注射0.2ml 用DMSO溶液溶解的C2－ceramide( 含0.0137mg 的C2－ceramide)，给药21d； （2）C2－ceramide皮下注射组:皮下注射0.2ml用DMSO 溶液溶解的C2－ceramide( 含0.046mg 的C2－ceramide)，给药21d； （3）DMSO 组:皮下注射1% DMSO 0.2ml，给药21d； （4）生理盐水组:注射0.2ml生理盐水，给予21d;给药时间一天一次。 每日同一时间称量裸鼠体重。体重观察和体重的检测:每日观察裸鼠一般状态变化，每次给药前记录裸鼠体重的变化。待实体瘤形成后，每次给药前1日用游标卡尺测量肿瘤的纵轴( 长径) 和横轴( 短径)，肿瘤体积按V = (长径×短径2 )×0.5 计算。皮下移植瘤重量的检测:试验分为C2－ceramide 皮下注射组、C2－ceramide腹腔注射组、DMSO 组、生理盐水组，在末次给药24h后，处死裸鼠，解剖并摘除皮下移植瘤。裸鼠尽量剥离移植瘤表面包膜，分析天平称重，摘取部分肿瘤组织作Western blot检查。 2、腹腔移植瘤裸鼠成瘤实验 无菌条件下取雌性BALB/C裸鼠16只，4－6周龄，体重18－21g。将裸鼠随机分为2组，C2－ceramide 腹腔注射组( intraperitoneal，IP)8只、DMSO腹腔注射组8只。将制好的细胞悬液的最终浓度定为1.8×106 /ml。无菌条件下，于裸鼠左下腹腹腔内接种细胞悬液300μl，含间皮瘤细胞5×106。正常饲养，于接种后第7天开始给药。 （1）C2－ceramide腹腔注射组:腹腔注射0.2ml用DMSO溶液溶解的C2－ceramide ( 含0.0137mg 的C2－ceramide) ，给药21d ； （2）DMSO 腹腔注射组:腹腔注射1%DMSO 2ml，给药21d。 给药时间一天一次。腹腔移植瘤体积变化的检测:试验分为C2－ceramide 腹腔注射组、DMSO腹腔注射组，在末次给药24h后，处死裸鼠，剖腹测量腹膜移植瘤体积，用游标卡尺测量肿瘤的纵轴(长径)和横轴(短径)，肿瘤体积按V = (长径×短径2)×0.5计算。 间皮瘤细胞接种后，第3天就出现皮下质地较硬的结节，直径约1－1.5cm。3周后处死裸鼠，摘取移植瘤，病理HE染色切片证实为间皮瘤，表明建立了稳定的移植瘤裸鼠模型。 目前化疗是间皮瘤患者最常见的治疗方法之一，有两种化疗方法，分别为全身化疗和术中化疗。全身化疗可以通过口服药片或静脉注射，药物进入血液后流经全身的过程中攻击癌细胞，术中化疗药物通常直接靶向肿瘤器官。此外培美曲塞、贝伐单抗、Keytruda和Opdivo是用于治疗间皮瘤的药物。 |
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