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wanglingyun1981

木虫 (小有名气)

[交流] 胚胎干细胞求助

求助:关于小鼠胚胎干细胞传代的方法

大虾们,我做小鼠的胚胎干细胞,胚胎接种于饲养层培养4-5d, 待ICM 充分长大, 出现卵圆柱状或岛状形态时, 在体视显微镜下(60×) , 用精细拉制的巴氏管将ICM 从下层的滋胚层细胞切割下来, 转入PBS 液滴中洗涤2 次, 再转入上层覆盖石蜡油的0.25胰酶-EDTA 消化液滴中, 在CO2 培养箱中作用5-8min。用另一支口径小于ICM 细胞团的巴氏管吸入含血清培养液, 因为细胞很小我看不清到底离散成几个细胞了,而且细胞团很难吹打散,将整个液滴都转移到新feeder上,接下来的几天没有看到新的克隆长出。是因为我吹打时太用力损伤了还是什么原因呢?我想知道各位做的时候用的玻璃管拉成什么样子,用的消化酶浓度是多少,具体怎样吹打才行?有照片最好。谢谢各位!!

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wanglingyun1981(金币+1):谢谢参与
顶一下
2楼2010-01-27 15:31:26
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