应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 交流求助：TA克隆载体
91/1返回列表
查看: 910  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

亦木水

铜虫 (小有名气)

[交流] 交流求助：TA克隆载体

前段时间刚把RNA-PCR做出来，得到目的片段，现在进行TA克隆时又遇到问题了。
我的目的片段是2500kb，用的是PMD-18T载体，可就是连完转化后挑的菌做酶切鉴定没结果。连接条件是4℃过夜。
是不是片段大了很难连上T载体？

[ Last edited by 亦木水 on 2009-4-27 at 13:36 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-04-13 12:26:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

198619

铜虫 (小有名气)
你说的问题应该不存在吧！
我用的也是和你一样的载体，可是连接条件是16℃30分钟以上，一般我是连接3-4小时
赞一下 回复此楼
2楼2009-04-13 12:40:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

亦木水

铜虫 (小有名气)
我们实验室以前做连接都是放4℃冰箱过夜的，都可以
所以这次我有点认为是片段的大小问题，
改天我用16℃试试吧
赞一下 回复此楼
3楼2009-04-13 12:55:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

speker

铁虫 (初入文坛)
还早呢，PMD18可以连接6k的片段，你还是先优化优化你的连接体系吧，外援片段浓度稍微大一点会比较好一些。
赞一下 回复此楼
4楼2009-04-13 13:47:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黑皮猩猩

铜虫 (初入文坛)
16℃一般过夜
22℃就一个小时
赞一下 回复此楼
5楼2009-04-13 16:51:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

亦木水

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by speker at 2009-4-13 13:47:
还早呢，PMD18可以连接6k的片段，你还是先优化优化你的连接体系吧，外援片段浓度稍微大一点会比较好一些。

连接体系的优化是哪些方面呢？
连接体系的体积
DNA的量与载体的量
连接温度与时间

还有么？
不知道大片段连接时是怎么一个情况
赞一下 回复此楼
6楼2009-04-13 23:04:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

亦木水

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 黑皮猩猩 at 2009-4-13 16:51:
16℃一般过夜
22℃就一个小时

我这次用16℃连接过夜的，后面转化测序结果还是空载。

纠结。。。。
赞一下 回复此楼
7楼2009-04-23 12:39:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
试试promega的T-easy吧
赞一下 回复此楼
8楼2009-04-23 12:53:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cascc

铜虫 (小有名气)
首先保证你如果选用了高保真酶，注意反应后加A.
按照solution1 5ul，载体1ul，回收片段4ul。
其次，2.5k连接没有问题，建议适当增加连接时间，可以放在16度过夜。
赞一下 回复此楼
9楼2009-04-24 21:50:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 亦木水 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 20:58 by Equinoxhua
[基金申请] 师弟论文见刊大半年才想起来申请专利，还能抢救一下吗？ +5 13108017953 2026-09-21 5/250 2026-09-27 16:46 by Leogzhya
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +3 zju2000 2026-09-26 3/150 2026-09-27 16:26 by lala1008
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:42 by 4IW0sJvtEqX8
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:26 by 4IW0sJvtEqX8
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:21 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:03 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 oeyPlfmMUpOC 2026-09-26 3/150 2026-09-27 09:13 by 4IW0sJvtEqX8
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:42 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:08 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:05 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:53 by XgCC8uTcwILl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:50 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 6/300 2026-09-27 05:42 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 5/250 2026-09-25 11:19 by yhq9807
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 7/350 2026-09-25 11:18 by yhq9807
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭