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亦木水

铜虫 (小有名气)

[交流] 交流求助:TA克隆载体

前段时间刚把RNA-PCR做出来,得到目的片段,现在进行TA克隆时又遇到问题了。
我的目的片段是2500kb,用的是PMD-18T载体,可就是连完转化后挑的菌做酶切鉴定没结果。连接条件是4℃过夜。
是不是片段大了很难连上T载体?

[ Last edited by 亦木水 on 2009-4-27 at 13:36 ]
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speker

铁虫 (初入文坛)

还早呢,PMD18可以连接6k的片段,你还是先优化优化你的连接体系吧,外援片段浓度稍微大一点会比较好一些。
4楼2009-04-13 13:47:53
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198619

铜虫 (小有名气)

你说的问题应该不存在吧!
我用的也是和你一样的载体,可是连接条件是16℃30分钟以上,一般我是连接3-4小时
2楼2009-04-13 12:40:26
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亦木水

铜虫 (小有名气)

我们实验室以前做连接都是放4℃冰箱过夜的,都可以
所以这次我有点认为是片段的大小问题,
改天我用16℃试试吧
3楼2009-04-13 12:55:15
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黑皮猩猩

铜虫 (初入文坛)

16℃一般过夜
22℃就一个小时
5楼2009-04-13 16:51:03
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