应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » CRISPR-Cas9中pTargetF-gRNA的构建
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 3209  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

POCO123

新虫 (初入文坛)

[交流] CRISPR-Cas9中pTargetF-gRNA的构建 已有7人参与

请问哪位大神用pCas,pTargetF做过CRISPR吗？我用一端带有目标序列N20的引物去扩pTargetF,也跑胶验证过了，用DpnI消化PCR产物一小时后，化转到大肠trans5a中让线性的质粒自己连接成环，但是做了好几次板子都不长，是我的做法有什么问题吗？

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2018-10-31 09:47:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我要怎么学习

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by POCO123 at 2018-10-31 09:47:07
请问哪位大神用pCas,pTargetF做过CRISPR吗？我用一端带有目标序列N20的引物去扩pTargetF,也跑胶验证过了，用DpnI消化PCR产物一小时后，化转到大肠trans5a中让线性的质粒自己连接成环，但是做了好几次板子都不长，是 ...

先自连再化转

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
2楼2018-11-08 00:42:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞鸟与冬天

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
请问楼主你的pCas,pTargetF质粒是买的吗？最近也要做这个，想问一下从哪里买比较快
赞一下 回复此楼
3楼2018-12-25 14:45:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

werq63

金虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小冀-: 金币-10, 屏蔽内容, 违规存档, 本帖禁止任何形式的广告信息，请注意 2019-03-18 11:09:54
本帖内容被屏蔽
4楼2019-02-02 11:17:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小de小流氓

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
5楼2019-03-17 23:03:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞鸟向前

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 飞鸟与冬天 at 2018-12-25 14:45:52
请问楼主你的pCas,pTargetF质粒是买的吗？最近也要做这个，想问一下从哪里买比较快

你好，请问你拿到质粒了么？我最近也需要~
赞一下 回复此楼
6楼2019-10-31 14:40:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

HK驱魔者

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
消化过后片段回收一下
赞一下 回复此楼
7楼2020-10-12 20:07:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

超转运rna

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by 我要怎么学习 at 2018-11-08 00:42:14
先自连再化转
...

请问怎么自连呀，请教一下，用酶吗

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2022-09-06 19:51:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 POCO123 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 307求调剂 +14 超级伊昂大王 2026-04-06 14/700 2026-04-08 07:03 by 无际的草原
[考研] 材料工程专业日语生求调剂 +9 111623 2026-04-07 9/450 2026-04-07 23:31 by 一只好果子?
[考研] 化工学硕 285求调剂 +23 Wisjxn 2026-04-07 23/1150 2026-04-07 22:55 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂 +8 冰冰，，， 2026-04-07 8/400 2026-04-07 22:49 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂085701 +15 1314捧花 2026-04-02 16/800 2026-04-07 18:15 by 蓝云思雨
[考研] 生物学求调剂 一志愿沪9，326分 +6 刘墨墨 2026-04-06 6/300 2026-04-06 19:36 by lijunpoly
[考研] 319求调剂 +3 handrui 2026-04-05 3/150 2026-04-06 09:33 by jp9609
[考研] 283求调剂 +5 baiiyu 2026-04-05 6/300 2026-04-05 20:35 by 啵啵啵0119
[考研] 308求调剂 +3 终不似从前 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:07 by 啵啵啵0119
[考研] 301求调剂 +3 XYPLR 2026-04-05 4/200 2026-04-05 19:07 by XYPLR
[考研] 生物学308分求调剂（一志愿华东师大） +8 相信必会光芒万� 2026-04-05 10/500 2026-04-05 12:19 by Hdyxbekcb
[考研] 能动调剂326专硕 +4 wan112233 2026-04-04 4/200 2026-04-04 22:47 by yu221
[考研] 材料调剂 +10 懒羊羊轻置玉臀 2026-04-02 11/550 2026-04-04 21:56 by laoshidan
[考研] 306求调剂 +3 hyb上名工 2026-04-02 3/150 2026-04-04 18:12 by 热情沙漠
[考研] 一志愿东北大学085901土木专硕345求调剂 +3 zxt11111 2026-04-04 3/150 2026-04-04 14:21 by 土木硕士招生
[考研] 322求调剂 +4 FZAC123 2026-04-03 4/200 2026-04-03 20:55 by zhq0425
[考研] 求调剂 +8 akdhjs 2026-04-03 8/400 2026-04-03 18:17 by 戴维ING
[考研] 326分求调剂 +3 于是乎呢 2026-04-01 5/250 2026-04-03 14:23 by 于是乎呢
[考研] 11408，284分，二战真诚求调剂 +4 12.27 2026-04-02 4/200 2026-04-03 14:14 by dxiaoxin
[考博] 申博求助 +3 Reee1Llll 2026-04-01 3/150 2026-04-02 22:29 by 这是一个无聊的�
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭