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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » CRISPR-Cas9中pTargetF-gRNA的构建
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POCO123

新虫 (初入文坛)

[交流] CRISPR-Cas9中pTargetF-gRNA的构建 已有7人参与

请问哪位大神用pCas,pTargetF做过CRISPR吗？我用一端带有目标序列N20的引物去扩pTargetF,也跑胶验证过了，用DpnI消化PCR产物一小时后，化转到大肠trans5a中让线性的质粒自己连接成环，但是做了好几次板子都不长，是我的做法有什么问题吗？

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1楼 2018-10-31 09:47:07
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我要怎么学习

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by POCO123 at 2018-10-31 09:47:07
请问哪位大神用pCas,pTargetF做过CRISPR吗？我用一端带有目标序列N20的引物去扩pTargetF,也跑胶验证过了，用DpnI消化PCR产物一小时后，化转到大肠trans5a中让线性的质粒自己连接成环，但是做了好几次板子都不长，是 ...

先自连再化转

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2楼2018-11-08 00:42:14
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飞鸟与冬天

新虫 (初入文坛)
★
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请问楼主你的pCas,pTargetF质粒是买的吗？最近也要做这个，想问一下从哪里买比较快
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3楼2018-12-25 14:45:52
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werq63

金虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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小冀-: 金币-10, 屏蔽内容, 违规存档, 本帖禁止任何形式的广告信息，请注意 2019-03-18 11:09:54
本帖内容被屏蔽
4楼2019-02-02 11:17:52
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小小de小流氓

禁虫 (小有名气)
★
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5楼2019-03-17 23:03:52
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飞鸟向前

新虫 (初入文坛)
★
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3楼: Originally posted by 飞鸟与冬天 at 2018-12-25 14:45:52
请问楼主你的pCas,pTargetF质粒是买的吗？最近也要做这个，想问一下从哪里买比较快

你好，请问你拿到质粒了么？我最近也需要~
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6楼2019-10-31 14:40:49
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HK驱魔者

铁虫 (正式写手)
★
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消化过后片段回收一下
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7楼2020-10-12 20:07:36
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超转运rna

新虫 (初入文坛)
★
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2楼: Originally posted by 我要怎么学习 at 2018-11-08 00:42:14
先自连再化转
...

请问怎么自连呀，请教一下，用酶吗

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8楼2022-09-06 19:51:48
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