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POCO123

新虫 (初入文坛)

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虫号: 11099947
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性别: MM
专业: 微生物学

[交流] CRISPR-Cas9中pTargetF-gRNA的构建已有7人参与

请问哪位大神用pCas,pTargetF做过CRISPR吗？我用一端带有目标序列N20的引物去扩pTargetF,也跑胶验证过了，用DpnI消化PCR产物一小时后，化转到大肠trans5a中让线性的质粒自己连接成环，但是做了好几次板子都不长，是我的做法有什么问题吗？

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1楼 2018-10-31 09:47:07

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飞鸟向前

新虫 (初入文坛)

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虫号: 1680795
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专业: 环境微生物学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

3楼: Originally posted by 飞鸟与冬天 at 2018-12-25 14:45:52
请问楼主你的pCas,pTargetF质粒是买的吗？最近也要做这个，想问一下从哪里买比较快

你好，请问你拿到质粒了么？我最近也需要~

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6楼2019-10-31 14:40:49

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我要怎么学习

新虫 (初入文坛)

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专业: 细胞生物学

引用回帖:

1楼: Originally posted by POCO123 at 2018-10-31 09:47:07
请问哪位大神用pCas,pTargetF做过CRISPR吗？我用一端带有目标序列N20的引物去扩pTargetF,也跑胶验证过了，用DpnI消化PCR产物一小时后，化转到大肠trans5a中让线性的质粒自己连接成环，但是做了好几次板子都不长，是 ...

先自连再化转

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2楼2018-11-08 00:42:14

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