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PCR到qPCR的问题 已有1人参与
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土壤DNA提取完后进行了普通PCR和凝胶成像，下一步想做qPCR，请问中间还要有哪些过渡实验吗？比如PCR产物纯化，目的基因克隆，质粒提取，测序等，是必须要做的吗？能不能用提取的DNA直接做qPCR？新手求指教？ 发自小木虫Android客户端 |
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lansong9783
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2楼2018-10-16 04:35:42
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要看想要的结果是什么，直接做，设置内参做相对定量。还是构建标曲做绝对定量。土壤DNA大多含有杂质，视提取结果看是否纯化。余下都是常规操作，一搜一大把操作路线。但首先要明白，自己想要的结果是什么 发自小木虫IOS客户端 |
3楼2018-10-16 09:11:00
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片段是在160到210bp之间的，应该符合要求。但是普通PCR凝胶成像显示出条带后，不是还要进行测序才能进一步确定目的基因吗？测序的话就要进行质粒提取，不还是要进行中间的那几步吗？ 发自小木虫Android客户端 |
4楼2018-10-16 23:06:08
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想要得到的结果是得出目的基因的相对丰度，我看有些文章说是用相对定量，但是也提取质粒做了标准曲线。基因相对丰度是样本中目的基因的决对拷贝数/内参基因16S-rRNA绝对拷贝数，这是相对定量吗？是不是文章中写错了吗？？ 发自小木虫Android客户端 |
5楼2018-10-16 23:34:50