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zzqian0351

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 3519027
注册: 2014-11-04
性别: MM
专业: 食品科学基础

[求助] 等温滴定测定蛋白质与金属离子的结合已有1人参与

我的蛋白质晶体结构中显示有钙离子结合位点，同时想用等温滴定量热仪测定结合焓变等数据。但是滴了几次都没有结果，试过的条件有缓冲液(Tris-HCl，水)，不同pH，蛋白质与金属离子的浓度与比例，均没有热量变化的峰。晶体结构显示一定是有结合的，可是滴定却怎么也滴不出来。想请问各位大神，是哪里出了问题，应该怎么改进，还有什么条件我没有想到呢？万分感谢！

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1楼 2018-10-10 16:57:00

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kaoyanjiu

新虫 (小有名气)

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专业: 生物物理、生物化学与分子

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
zzqian0351(西门吹雪170代发): 金币+5, 鼓励热心回帖交流 2018-10-16 10:31:45

结合我之前做ITC的经验，做不好ITC实验要注意的细节有。
1.仪器状态：不知道你们用的哪家的仪器，仪器使用前，要用过0.22um的ddH2O水彻底清洗前，清洗后要用水滴水实验验证的，观察吸放热峰值差在一定误差内才能上机。
2.样品状态：溶液过膜处理了吗，两种溶液浓度是否得当？多次试样之后结果没有明显的吸放热现象，请问你的吸热差值设置的多少标度？确定误差标度后，实验中观察吸放热差值稳定超出才有结合。差值不明显就继续调节溶液的浓度。
3.滴定程序：请问你是A滴B还是B滴A，金属离子和蛋白的滴定一般是金属离子滴蛋白的。样品池温度，程序的每一滴体积和滴数还有滴定间隔都是需要通过你的实验结果来慢慢调整优化的，ITC实验没有前人经验和结果的总结，你也只能从试样的结果慢慢确定优化滴定液和带滴定液的浓度和滴定程序的参数。
注意好这几个细节，多用几个浓度和滴定程序一般都能看出有结合吸放热，找到吸放热就简单了，接下来就是调整程序和浓度，根据滴定的结果优化程序以得到好看的拟合曲线和准确的结合系数和K值。
最后祝你实验顺利~

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