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wdongdong

金虫 (小有名气)

[交流] 4000bp基因连接

本人现在构建一个四千左右的片段,发现很难连上
    各位大虾,有啥建议
谢谢
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

我也遇到了这样的问题,3500左右的片段,老是连不上,我是先往T载体上连的,每次都是空载体.

希望高手指导
2楼2009-04-09 20:54:11
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sunqx

木虫 (著名写手)

我练过10kb的  感受态好  连接时间长点 没问题
3楼2009-04-09 21:04:21
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十一月

银虫 (正式写手)

T载体对于这么长度的片段是有点难度。你尝试加一些氯化钴或者PEG等
4楼2009-04-09 21:54:27
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 十一月 at 2009-4-9 21:54:
T载体对于这么长度的片段是有点难度。你尝试加一些氯化钴或者PEG等

怎么加啊,是直接往体系里加吗,加多少
5楼2009-04-09 21:55:46
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zimu000

铁虫 (小有名气)

期待答案!
6楼2009-04-10 20:42:51
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caoqishu

铜虫 (初入文坛)


直接连到你需要的载体中,且做好转化到TOP10或XL-gold感受态。我连过好几次都行。
7楼2009-04-13 19:53:21
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xmchen1015

银虫 (小有名气)

在连接反应体系中,加5%的PEG,连接时间1.5-2.0小时就差不多
8楼2009-04-14 16:41:08
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daigakusei

铁虫 (初入文坛)

试一试Takara的pMD-20,连接的时间延长到2小时,在PCR仪上做。
9楼2009-04-18 22:03:20
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