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4000bp基因连接
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wdongdong
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4000bp基因连接
本人现在构建一个四千左右的片段,发现很难连上
各位大虾,有啥建议
谢谢
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1楼
2009-04-09 19:54:50
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专业: 作物种质资源与遗传育种学
我也遇到了这样的问题,3500左右的片段,老是连不上,我是先往T载体上连的,每次都是空载体.
希望高手指导
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2楼
2009-04-09 20:54:11
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我练过10kb的 感受态好 连接时间长点 没问题
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2009-04-09 21:04:21
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专业: 作物杂种优势及其利用
T载体对于这么长度的片段是有点难度。你尝试加一些氯化钴或者PEG等
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4楼
2009-04-09 21:54:27
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引用回帖:
Originally posted by
十一月
at 2009-4-9 21:54:
T载体对于这么长度的片段是有点难度。你尝试加一些氯化钴或者PEG等
怎么加啊,是直接往体系里加吗,加多少
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5楼
2009-04-09 21:55:46
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2009-04-10 20:42:51
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专业: 肿瘤生物治疗
直接连到你需要的载体中,且做好转化到TOP10或XL-gold感受态。我连过好几次都行。
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7楼
2009-04-13 19:53:21
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专业: 生物大分子结构与功能
在连接反应体系中,加5%的PEG,连接时间1.5-2.0小时就差不多
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8楼
2009-04-14 16:41:08
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虫号: 446484
注册: 2007-10-29
专业: 食用真菌学
试一试Takara的pMD-20,连接的时间延长到2小时,在PCR仪上做。
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9楼
2009-04-18 22:03:20
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