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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 4000bp基因连接
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wdongdong

金虫 (小有名气)

[交流] 4000bp基因连接

本人现在构建一个四千左右的片段，发现很难连上
    各位大虾，有啥建议
谢谢
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1楼 2009-04-09 19:54:50
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
我也遇到了这样的问题,3500左右的片段,老是连不上,我是先往T载体上连的,每次都是空载体.

希望高手指导
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2楼2009-04-09 20:54:11
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sunqx

木虫 (著名写手)
我练过10kb的  感受态好  连接时间长点 没问题
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3楼2009-04-09 21:04:21
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十一月

银虫 (正式写手)
T载体对于这么长度的片段是有点难度。你尝试加一些氯化钴或者PEG等
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4楼2009-04-09 21:54:27
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 十一月 at 2009-4-9 21:54:
T载体对于这么长度的片段是有点难度。你尝试加一些氯化钴或者PEG等

怎么加啊,是直接往体系里加吗,加多少
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5楼2009-04-09 21:55:46
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zimu000

铁虫 (小有名气)
期待答案！
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6楼2009-04-10 20:42:51
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caoqishu

铜虫 (初入文坛)
直接连到你需要的载体中，且做好转化到TOP10或XL-gold感受态。我连过好几次都行。
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7楼2009-04-13 19:53:21
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xmchen1015

银虫 (小有名气)
在连接反应体系中,加5%的PEG,连接时间1.5-2.0小时就差不多
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8楼2009-04-14 16:41:08
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daigakusei

铁虫 (初入文坛)
试一试Takara的pMD-20,连接的时间延长到2小时，在PCR仪上做。
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9楼2009-04-18 22:03:20
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