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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 超滤机超滤蛋白质后，反而蛋白质活性越来越低
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min88

新虫 (小有名气)

[交流] 超滤机超滤蛋白质后，反而蛋白质活性越来越低 已有2人参与

超滤一段时间蛋白质活性基本没有了，生产中蛋白质堵超滤膜比较严重，都是用尿素洗超滤膜，超滤过程一直保持降温，超滤出来的废液检测没有活性，那就是蛋白质失活了，不知道什么原因造，每次都前功尽弃，特别难受啊，请各位指教

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1楼 2018-10-09 11:41:50
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
超滤是会造成蛋白失活的，建议能够柱纯化的话采用此法
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2楼2018-10-09 14:38:02
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kaoyanjiu

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
听你问题描述1、超滤过膜下来的废液没有活性。----膜没问题的话，蛋白都被截留在膜上，那么废液里蛋白很少，检测不到活性应该是正常的吧。
2、尿素洗超滤膜-----不知道你用的什么超滤膜过滤系统，截留大小选择的是否得当能截留住你的蛋白？尿素洗完超滤膜后是否用置换buffer清洗超滤膜呢，尿素对你的反应体系是否有影响？
3、超滤出来的蛋白活性就没有了----是否做过不超滤的蛋白呢?同样的粗蛋白超滤和不超滤放置一定时间，对酶活做个对比看看，是否是放置时间对酶活有影响。
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3楼2018-10-09 16:42:49
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