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min88

新虫 (小有名气)

[交流] 超滤机超滤蛋白质后,反而蛋白质活性越来越低 已有2人参与

超滤一段时间蛋白质活性基本没有了,生产中蛋白质堵超滤膜比较严重,都是用尿素洗超滤膜,超滤过程一直保持降温,超滤出来的废液检测没有活性,那就是蛋白质失活了,不知道什么原因造,每次都前功尽弃,特别难受啊,请各位指教

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渊博震天

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Yeast Display

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超滤是会造成蛋白失活的,建议能够柱纯化的话采用此法
2楼2018-10-09 14:38:02
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kaoyanjiu

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
听你问题描述1、超滤过膜下来的废液没有活性。----膜没问题的话,蛋白都被截留在膜上,那么废液里蛋白很少,检测不到活性应该是正常的吧。
2、尿素洗超滤膜-----不知道你用的什么超滤膜过滤系统,截留大小选择的是否得当能截留住你的蛋白?尿素洗完超滤膜后是否用置换buffer清洗超滤膜呢,尿素对你的反应体系是否有影响?
3、超滤出来的蛋白活性就没有了----是否做过不超滤的蛋白呢?同样的粗蛋白超滤和不超滤放置一定时间,对酶活做个对比看看,是否是放置时间对酶活有影响。
3楼2018-10-09 16:42:49
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