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fhywdj520

禁虫 (初入文坛)
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1楼 2018-10-08 16:24:17
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cry_2013

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们做连接载体和片段多用1:3（其实比例稍微差点应该影响不是特别大），连接时16℃过夜（我们16℃过夜后4℃放半天，下午做转化，不知道跟这半天有没有关系），大片段连接效率不是特别高，单菌落长得不多（这种情况往往是连上的可能性比较大，也可能和感受态细胞有关系），如果连接产物很大我们会用电转的方法（感觉这个方法比化转效率高很多），还有就是是要保证酶切回收产物的质量（这个应该是最基本的），其它的就想不到了，实在不行就分两段连。。。。
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2楼2018-10-09 08:43:22
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fhywdj520

禁虫 (初入文坛)
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3楼2018-10-09 08:55:14
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莫等闲111

版主 (知名作家)

优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能你的双酶切效果不好，建议可以分步酶切，先用酶活弱的切然后回收，再用酶活较高的酶切，之后回收，这样能确保每个酶的效果。当然过程复杂了些，不过可以试试。
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站内信：http:///muchong.com/bbs/box.php评分及查找应助者发送的密码http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7465070&fpage=1
4楼2018-10-09 19:08:28
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fhywdj520

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5楼2018-10-10 10:24:45
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