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fhywdj520

禁虫 (初入文坛)

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cry_2013

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们做连接载体和片段多用1:3(其实比例稍微差点应该影响不是特别大),连接时16℃过夜(我们16℃过夜后4℃放半天,下午做转化,不知道跟这半天有没有关系),大片段连接效率不是特别高,单菌落长得不多(这种情况往往是连上的可能性比较大,也可能和感受态细胞有关系),如果连接产物很大我们会用电转的方法(感觉这个方法比化转效率高很多),还有就是是要保证酶切回收产物的质量(这个应该是最基本的),其它的就想不到了,实在不行就分两段连。。。。
2楼2018-10-09 08:43:22
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fhywdj520

禁虫 (初入文坛)

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3楼2018-10-09 08:55:14
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莫等闲111

版主 (知名作家)

优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能你的双酶切效果不好,建议可以分步酶切,先用酶活弱的切然后回收,再用酶活较高的酶切,之后回收,这样能确保每个酶的效果。当然过程复杂了些,不过可以试试。
站内信:http:///muchong.com/bbs/box.php评分及查找应助者发送的密码http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=7465070&fpage=1
4楼2018-10-09 19:08:28
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fhywdj520

禁虫 (初入文坛)

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5楼2018-10-10 10:24:45
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