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pangdou

铁杆木虫 (初入文坛)

[交流] 求助:关于载体连接的问题!麻烦大侠了!

最近小弟构建新载体,载体上可要的酶切位点为HindIII和XbarI,小片段酶切位点为Bam HI和和HindIII,两个只有一个酶切位点相同,载体上没有XbarI位点,我先用Kelnow大片段进行末端补平,然后用T4进行连接,载体:片段为1:3,然后先进行连接,在进行补平,然后在连接,还是不行,请教各位大侠有什么好办法可以连上载体!小弟先谢过!

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-2 at 15:18 ]
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zimu000

铁虫 (小有名气)

你好!能否请楼上的详细解释一下,呵呵,谢谢了!
3楼2009-04-10 20:46:05
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

★ ★
pangdou(金币+1,VIP+0):谢谢帮助! 4-13 21:24
pangdou(金币+1,VIP+0): 4-22 21:27
"我先用Kelnow大片段进行末端补平"--XbarI是粘性末端,而你将它变成平末端?你为什么不给你的目的片段加一个粘性末端和XbarI互补的序列呢?设计引物加一个粘性末端,然后,pcr目的片段产物就可以带上粘性末端了,这样,再连接不是容易吗?
会当凌绝顶,一览众山小
2楼2009-04-09 19:10:37
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