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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：关于载体连接的问题！麻烦大侠了！
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pangdou

铁杆木虫 (初入文坛)

[交流] 求助：关于载体连接的问题！麻烦大侠了！

最近小弟构建新载体，载体上可要的酶切位点为HindIII和XbarI，小片段酶切位点为Bam HI和和HindIII，两个只有一个酶切位点相同，载体上没有XbarI位点，我先用Kelnow大片段进行末端补平，然后用T4进行连接，载体：片段为1：3，然后先进行连接，在进行补平，然后在连接，还是不行，请教各位大侠有什么好办法可以连上载体！小弟先谢过！

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-2 at 15:18 ]
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1楼 2009-04-09 15:46:23
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★ ★
pangdou(金币+1,VIP+0):谢谢帮助！ 4-13 21:24
pangdou(金币+1,VIP+0): 4-22 21:27
"我先用Kelnow大片段进行末端补平"--XbarI是粘性末端，而你将它变成平末端？你为什么不给你的目的片段加一个粘性末端和XbarI互补的序列呢？设计引物加一个粘性末端，然后，pcr目的片段产物就可以带上粘性末端了，这样，再连接不是容易吗？
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会当凌绝顶，一览众山小
2楼2009-04-09 19:10:37
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zimu000

铁虫 (小有名气)
你好！能否请楼上的详细解释一下，呵呵，谢谢了！
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3楼2009-04-10 20:46:05
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