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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 求助，提取的质粒浓度过低是为什么？是和基因有关吗？
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Yin0927

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助，提取的质粒浓度过低是为什么？是和基因有关吗？ 已有1人参与

如题，我们实验室使用的质粒是pRQ76 [虽然我也不知道这是啥质粒......]，氯霉素抗性，菌种是DH5a, 每次都是37度过夜摇菌培养，但浓度都很低，菌落PCR后摇的菌都没法测序。小提盒是Axygen，操作都是一样的，这个质粒以前也用过，浓度也不低。想问一下，这个质粒浓度很低是为什么？和我们导入的外源基因有关吗？
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1楼 2018-09-28 11:24:19
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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)
不同质粒拷贝数有区别，可能是这个原因。

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2楼2018-09-28 11:36:09
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Yin0927

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xuweitao at 2018-09-28 11:36:09
不同质粒拷贝数有区别，可能是这个原因。

这个质粒以前也导入过其他基因，浓度完全没有问题，就很疑惑....
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3楼2018-09-28 11:39:05
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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Yin0927 at 2018-09-28 11:39:05
这个质粒以前也导入过其他基因，浓度完全没有问题，就很疑惑.......

菌浓也低吗？如果基因表达对菌有影响一般菌就少。
做个平行实验，比较不同基因有区别好了。
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4楼2018-09-28 11:58:49
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Yin0927

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xuweitao at 2018-09-28 11:58:49
菌浓也低吗？如果基因表达对菌有影响一般菌就少。
做个平行实验，比较不同基因有区别好了。...

菌液浓度也不低，就提完的质粒低。平行实验的话，其他基因导入是正常的，就这个基因质粒浓度20+，30+

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5楼2018-09-28 12:04:32
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macgray11

禁虫 (小有名气)
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6楼2018-09-28 15:55:44
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