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Yin0927

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助,提取的质粒浓度过低是为什么?是和基因有关吗? 已有1人参与

如题,我们实验室使用的质粒是pRQ76 [虽然我也不知道这是啥质粒......],氯霉素抗性,菌种是DH5a, 每次都是37度过夜摇菌培养,但浓度都很低,菌落PCR后摇的菌都没法测序。小提盒是Axygen,操作都是一样的,这个质粒以前也用过,浓度也不低。想问一下,这个质粒浓度很低是为什么?和我们导入的外源基因有关吗?
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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)

不同质粒拷贝数有区别,可能是这个原因。

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2楼2018-09-28 11:36:09
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Yin0927

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xuweitao at 2018-09-28 11:36:09
不同质粒拷贝数有区别,可能是这个原因。

这个质粒以前也导入过其他基因,浓度完全没有问题,就很疑惑....
3楼2018-09-28 11:39:05
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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Yin0927 at 2018-09-28 11:39:05
这个质粒以前也导入过其他基因,浓度完全没有问题,就很疑惑.......

菌浓也低吗?如果基因表达对菌有影响一般菌就少。
做个平行实验,比较不同基因有区别好了。
4楼2018-09-28 11:58:49
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Yin0927

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xuweitao at 2018-09-28 11:58:49
菌浓也低吗?如果基因表达对菌有影响一般菌就少。
做个平行实验,比较不同基因有区别好了。...

菌液浓度也不低,就提完的质粒低。平行实验的话,其他基因导入是正常的,就这个基因质粒浓度20+,30+

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5楼2018-09-28 12:04:32
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macgray11

禁虫 (小有名气)

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6楼2018-09-28 15:55:44
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