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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【已解决】做RACE的同胞看过来～～～～～～～～～
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守口如瓶1

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【已解决】做RACE的同胞看过来～～～～～～～～～

使用smart试剂盒做5'RACE，合成第一链cDNA的过程中是否一定要过柱纯化呢？

    我看到的说明书上是过柱纯化后利用末端转移酶活性继续合成第一链cDNA，使之含有5'接头引物序列，但有人说不用过柱，因此感到一些疑惑。

   望做RACE的同胞能够多多指教。

[ Last edited by 守口如瓶1 on 2009-4-11 at 21:40 ]
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1楼 2009-04-08 16:18:22
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守口如瓶1

铁虫 (初入文坛)
急求解答
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2楼2009-04-09 11:33:46
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hugang2004_2000

木虫 (正式写手)
smart合成的是杂交链，在合成第一链的之前就已经加了接头的啊。怎么我用的试剂盒（cat. no. 634914）里面没有过柱子的步骤？过柱子，好像是cDNA文库的时候才用到的吧？
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3楼2009-04-11 10:39:10
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shenmene

金虫 (正式写手)

贴心小棉袄
不用过的啊
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小溪边的戏水，稻田里的长长黄黄的谷穗，池塘里的小泥鳅，夏夜里的萤火虫...谁为我摘下幽兰天空的那弯月...
4楼2009-04-11 11:46:59
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守口如瓶1

铁虫 (初入文坛)
谢谢哈，我已经找到答案了，说是用smart试剂盒很贵，那个RT酶除了有反转录酶的活性还有末端转移酶活性自动加CCC（咋就这专一捏），不用另外的末端转移酶，过柱的那种是另外一种试剂盒。

我就纳闷，我找的说明书是咱一回事？

还是谢谢各位了
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5楼2009-04-11 21:38:38
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