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dsl7564335

新虫 (初入文坛)

[求助] HPLC操作 已有2人参与

洗柱子用的等度洗脱,分析用的二元梯度洗脱。那我洗完柱子后,进样的时候应该怎么平衡柱子啊?第一次用液相,请各位大神赐教。

@学术巨星 @学术巨星 @wyy080214 @wyy080214 @superyeast @klicking @鸭绿江畔 发自小木虫Android客户端
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匿名

禁虫 (知名作家)

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2楼2018-09-25 11:45:26
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jianxiao88

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
方法1、梯度洗脱需要用到A、B两路,因此在平衡时,可设置A:B=50:50平衡一段时间(5-10min左右即可),之后再将比例调整为梯度程序的初始比例平衡一段时间,待基线稳定后即可进样;
方法2、可以先直接运行一次梯度程序,之后再进样。一般情况下,运行完一次程序,系统即可平衡好。
利弊分析:前者费人工省时间,后者省人工费时间,可根据实际情况自行选择(个人感觉后者效果要优于前者)。

若该方法运行时间过长,后者特别耽误时间,也可自己新建梯度方法,专用于平衡系统。
1、初始比例和结束比例最好与原方法保持一致;
2、通过缩短梯度变化的时间来达到节省时间的目的。
多多学习
3楼2018-09-25 14:07:40
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dsl7564335

新虫 (初入文坛)

回答的很详尽,非常感谢。

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4楼2018-09-25 14:51:25
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dsl7564335

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shen2003 at 2018-09-25 11:45:26
有进样后平衡选项,你也可以直接写到二元梯度后面,再加十五分钟的初始浓度平衡

谢谢!

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5楼2018-09-25 14:56:00
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wyys7140

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
比如A是水项,B是有机相,初始流动相是A:B=90:10,(以HPLC为例,UPLC时间适当减少)那你可以设置:
0-5min A:B=90:10,
5-10min A:B=90→10:10→90,
10-15min   A:B=10:90,
15-25min A:B=10→90:90→10,
时间上可以适当调整,只要你需要的物质能出来就行
6楼2018-09-26 09:24:30
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