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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC操作
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dsl7564335

新虫 (初入文坛)

[求助] HPLC操作 已有2人参与

洗柱子用的等度洗脱，分析用的二元梯度洗脱。那我洗完柱子后，进样的时候应该怎么平衡柱子啊？第一次用液相，请各位大神赐教。

@学术巨星 @学术巨星 @wyy080214 @wyy080214 @superyeast @klicking @鸭绿江畔 发自小木虫Android客户端
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1楼 2018-09-25 11:29:38
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匿名

禁虫 (知名作家)
本帖仅楼主可见
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2楼2018-09-25 11:45:26
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jianxiao88

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
方法1、梯度洗脱需要用到A、B两路，因此在平衡时，可设置A：B=50：50平衡一段时间（5-10min左右即可），之后再将比例调整为梯度程序的初始比例平衡一段时间，待基线稳定后即可进样；
方法2、可以先直接运行一次梯度程序，之后再进样。一般情况下，运行完一次程序，系统即可平衡好。
利弊分析：前者费人工省时间，后者省人工费时间，可根据实际情况自行选择（个人感觉后者效果要优于前者）。

若该方法运行时间过长，后者特别耽误时间，也可自己新建梯度方法，专用于平衡系统。
1、初始比例和结束比例最好与原方法保持一致；
2、通过缩短梯度变化的时间来达到节省时间的目的。
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多多学习
3楼2018-09-25 14:07:40
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dsl7564335

新虫 (初入文坛)
回答的很详尽，非常感谢。

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4楼2018-09-25 14:51:25
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dsl7564335

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shen2003 at 2018-09-25 11:45:26
有进样后平衡选项，你也可以直接写到二元梯度后面，再加十五分钟的初始浓度平衡

谢谢！

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5楼2018-09-25 14:56:00
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wyys7140

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
比如A是水项，B是有机相，初始流动相是A：B=90:10，（以HPLC为例，UPLC时间适当减少）那你可以设置：
0-5min A:B=90:10,
5-10min A:B=90→10:10→90,
10-15min   A:B=10:90,
15-25min A:B=10→90:90→10,
时间上可以适当调整，只要你需要的物质能出来就行
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6楼2018-09-26 09:24:30
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