24小时热门版块排行榜    

查看: 661  |  回复: 6
当前主题已经存档。

cofe

金虫 (小有名气)

[交流] 关于原核表达的问题

表达质粒是pET28和pET30,属主菌是BL21。把片段转进去后,PCR检测是阳性的菌经常会摇不起来,有时会抽不到质粒,有时重新划板也不长,可能有些什么原因呢?同样的体系表达另外一个基因没问题。
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

DLLB

金虫 (小有名气)


cofe(金币+1,VIP+0):好建议! 4-9 09:09
鉴于你所说是用菌落PCR,其检测的阳性克隆可能只是假阳性,建议用空质粒做阴性对照,而不是以不加模版做阴性对照
2楼2009-04-08 15:06:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)



cofe(金币+1,VIP+0):thanks 4-9 11:47
PCR检测不准确。
3楼2009-04-08 16:34:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader


cofe(金币+1,VIP+0):thanks 4-9 18:00
解决建议:
1 抗生素浓度筛选是否有问题
2 转化是否真的转进去了,需要检测
3 平行操作,对照一定要严格
会当凌绝顶,一览众山小
4楼2009-04-09 15:12:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恒星年

银虫 (正式写手)


cofe(金币+1,VIP+0):3x 4-10 11:31
可能是PCR
5楼2009-04-10 10:04:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恒星年

银虫 (正式写手)


cofe(金币+1,VIP+0):3x 4-10 11:31
可能是PCR假阳性,建议多挑几个克隆子,提质粒做进一步酶切验证
6楼2009-04-10 10:05:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞侠8683

新虫 (小有名气)

应进一步做酶切验证
7楼2009-04-15 08:53:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cofe 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 5+3 想要一壶桃花水 2026-03-25 7/350 2026-03-26 03:29 by sjeidudkso
[考研] 0856求调剂 +5 zhn03 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:58 by peike
[考研] 07化学303求调剂 +5 睿08 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:46 by 418490947
[考研] 08工学调剂 +13 用户573181 2026-03-20 18/900 2026-03-25 22:00 by zbssa
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 8/400 2026-03-25 20:34 by 热情沙漠
[考研] 321求调剂 +3 璞玉~~ 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:07 by Zhanglab-TJU
[考研] 0854电子信息求调剂 +7 α____ 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:37 by α____
[考研] 0854人工智能方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-24 4/200 2026-03-25 13:29 by 2177681040
[考研] B区考研调剂 +4 yqdszhdap- 2026-03-22 5/250 2026-03-25 08:51 by baoball
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 化工专硕求调剂 +3 question挽风 2026-03-24 3/150 2026-03-24 18:48 by jhhcooi
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:46 by 星空星月
[考研] 277分求调剂,跨调材料 +3 考研调剂lxh 2026-03-24 3/150 2026-03-24 13:52 by JourneyLucky
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
[考研] 求调剂一志愿海大,0703化学学硕304分,有大创项目,四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见