24小时热门版块排行榜    

查看: 733  |  回复: 6
当前主题已经存档。

cofe

金虫 (小有名气)

[交流] 关于原核表达的问题

表达质粒是pET28和pET30,属主菌是BL21。把片段转进去后,PCR检测是阳性的菌经常会摇不起来,有时会抽不到质粒,有时重新划板也不长,可能有些什么原因呢?同样的体系表达另外一个基因没问题。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

DLLB

金虫 (小有名气)


cofe(金币+1,VIP+0):好建议! 4-9 09:09
鉴于你所说是用菌落PCR,其检测的阳性克隆可能只是假阳性,建议用空质粒做阴性对照,而不是以不加模版做阴性对照
2楼2009-04-08 15:06:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)



cofe(金币+1,VIP+0):thanks 4-9 11:47
PCR检测不准确。
3楼2009-04-08 16:34:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader


cofe(金币+1,VIP+0):thanks 4-9 18:00
解决建议:
1 抗生素浓度筛选是否有问题
2 转化是否真的转进去了,需要检测
3 平行操作,对照一定要严格
会当凌绝顶,一览众山小
4楼2009-04-09 15:12:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恒星年

银虫 (正式写手)


cofe(金币+1,VIP+0):3x 4-10 11:31
可能是PCR
5楼2009-04-10 10:04:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恒星年

银虫 (正式写手)


cofe(金币+1,VIP+0):3x 4-10 11:31
可能是PCR假阳性,建议多挑几个克隆子,提质粒做进一步酶切验证
6楼2009-04-10 10:05:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

飞侠8683

新虫 (小有名气)

应进一步做酶切验证
7楼2009-04-15 08:53:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cofe 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +5 zju2000 2026-08-16 5/250 2026-08-16 23:23 by Haru815
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见