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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于原核表达的问题
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cofe

金虫 (小有名气)

[交流] 关于原核表达的问题

表达质粒是pET28和pET30，属主菌是BL21。把片段转进去后，PCR检测是阳性的菌经常会摇不起来，有时会抽不到质粒，有时重新划板也不长，可能有些什么原因呢？同样的体系表达另外一个基因没问题。
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1楼 2009-04-08 14:15:21
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DLLB

金虫 (小有名气)
★
cofe(金币+1,VIP+0):好建议！ 4-9 09:09
鉴于你所说是用菌落PCR,其检测的阳性克隆可能只是假阳性，建议用空质粒做阴性对照，而不是以不加模版做阴性对照
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2楼2009-04-08 15:06:24
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
★
cofe(金币+1,VIP+0):thanks 4-9 11:47
PCR检测不准确。
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3楼2009-04-08 16:34:50
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★
cofe(金币+1,VIP+0):thanks 4-9 18:00
解决建议：
1 抗生素浓度筛选是否有问题
2 转化是否真的转进去了，需要检测
3 平行操作，对照一定要严格
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会当凌绝顶，一览众山小
4楼2009-04-09 15:12:53
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恒星年

银虫 (正式写手)
★
cofe(金币+1,VIP+0):3x 4-10 11:31
可能是PCR
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5楼2009-04-10 10:04:46
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恒星年

银虫 (正式写手)
★
cofe(金币+1,VIP+0):3x 4-10 11:31
可能是PCR假阳性，建议多挑几个克隆子，提质粒做进一步酶切验证
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6楼2009-04-10 10:05:39
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飞侠8683

新虫 (小有名气)
应进一步做酶切验证
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7楼2009-04-15 08:53:52
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