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草哥cium

新虫 (正式写手)

[求助] 保的大肠杆菌表达不出来了 已有1人参与

我用40%左右的甘油保的bl21( de3)放在-20差不多三个多月了。。之前表达纯化都很顺利,但是最近直接拿出来摇菌就纯化表达的不好了。。。   难道是质粒丢失?。。但是在有抗性的LB里都扩增的还不错啊。。。。是不是菌放久了就会影响原核表达啊。。。还是啥原因。。该怎么办呀

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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

2楼2018-09-19 23:08:49
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Jack_Willan

木虫 (小有名气)

应该放-80  不过表达不出来我也不懂

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3楼2018-09-19 23:18:11
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阿门阿前1991

金虫 (小有名气)

大肠杆菌一般用15%,20%甘油保存
总会出现一个温柔的人,让你变得温暖,然后默默离开。
4楼2018-09-20 08:13:56
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草哥cium

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Jack_Willan at 2018-09-19 23:18:11
应该放-80  不过表达不出来我也不懂

可能是表达量变少了很多!...不知道重新划线行不行哇

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5楼2018-09-20 17:00:40
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Tsingavin

木虫 (小有名气)

分享是一种快乐
6楼2018-09-21 07:21:22
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werq63

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

BL21里面有核酸酶,长期保存可能会导致质粒丢失,可以划线复苏一下然后再提取质粒,鉴定质粒正确之后再转化到BL21,以后以质粒的形式保存,DH5a提取的质粒
7楼2018-09-25 09:39:13
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