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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母异源表达
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Yajing223

新虫 (初入文坛)

[求助] 酵母异源表达 已有1人参与

做辣根过氧化物酶在毕赤酵母中的表达，酶基因是公司合成的，载体是ppic9k，一直没有酶活，跑蛋白胶也看不见条带，哭泣

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1楼 2018-09-17 21:29:12
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borrysa

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-10-28 09:52:39
你是用electroporation吗？同源重组确定了？
HRP你可以直接用板上长的colonies在48孔板上小量诱导表达。 然后在48 孔板测酶活，有了酶活了再继续做下面的实验。
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5楼2018-09-19 05:43:18
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
Yajing223(渊博震天代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-09-18 08:23:41
建议你换个表达系统或者载体试试，毕赤酵母表达，有时候就是这样莫名其妙，我做的漆酶也是，前面用9k这个载体不得行，后面换成一个组成性表达载体，就可以了

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2楼2018-09-18 03:02:25
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
换成pGAP

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3楼2018-09-18 10:16:46
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biosci

捐助贵宾 (知名作家)
这是个组成型表达载体

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4楼2018-09-18 10:17:07
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Yajing223

新虫 (初入文坛)
嗯嗯，确定同源重组了

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6楼2018-09-25 21:13:49
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Yajing223

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by biosci at 2018-09-18 10:16:46
换成pGAP

请问可以交换这个质粒吗？我们实验室没有这个质粒？

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7楼2018-10-08 15:29:42
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Yajing223

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 张凡云 at 2018-09-18 03:02:25
建议你换个表达系统或者载体试试，毕赤酵母表达，有时候就是这样莫名其妙，我做的漆酶也是，前面用9k这个载体不得行，后面换成一个组成性表达载体，就可以了

请问可以交换组成型质粒吗？我们实验室没有组成型质粒。

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8楼2018-10-08 15:30:48
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)
你想怎么交换

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9楼2018-10-08 17:49:05
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Yajing223

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 张凡云 at 2018-10-08 17:49:05
你想怎么交换

看看有木有你们没有的菌株或者质粒，刚好我有，然后交换一下

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10楼2018-10-09 15:44:11
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