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Yajing223

新虫 (初入文坛)

[求助] 酵母异源表达 已有1人参与

做辣根过氧化物酶在毕赤酵母中的表达,酶基因是公司合成的,载体是ppic9k,一直没有酶活,跑蛋白胶也看不见条带,哭泣

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borrysa

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-10-28 09:52:39
你是用electroporation吗?同源重组确定了?
HRP你可以直接用板上长的colonies在48孔板上小量诱导表达。 然后在48 孔板测酶活,有了酶活了再继续做下面的实验。
5楼2018-09-19 05:43:18
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普通回帖

张凡云

至尊木虫 (职业作家)

★ ★
Yajing223(渊博震天代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2018-09-18 08:23:41
建议你换个表达系统或者载体试试,毕赤酵母表达,有时候就是这样莫名其妙,我做的漆酶也是,前面用9k这个载体不得行,后面换成一个组成性表达载体,就可以了

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2楼2018-09-18 03:02:25
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


3楼2018-09-18 10:16:46
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


4楼2018-09-18 10:17:07
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Yajing223

新虫 (初入文坛)

6楼2018-09-25 21:13:49
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Yajing223

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by biosci at 2018-09-18 10:16:46
换成pGAP

请问可以交换这个质粒吗?我们实验室没有这个质粒?

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7楼2018-10-08 15:29:42
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Yajing223

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 张凡云 at 2018-09-18 03:02:25
建议你换个表达系统或者载体试试,毕赤酵母表达,有时候就是这样莫名其妙,我做的漆酶也是,前面用9k这个载体不得行,后面换成一个组成性表达载体,就可以了

请问可以交换组成型质粒吗?我们实验室没有组成型质粒。

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8楼2018-10-08 15:30:48
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张凡云

至尊木虫 (职业作家)

9楼2018-10-08 17:49:05
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Yajing223

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 张凡云 at 2018-10-08 17:49:05
你想怎么交换

看看有木有你们没有的菌株或者质粒,刚好我有,然后交换一下

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10楼2018-10-09 15:44:11
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