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蓝色基因

金虫 (正式写手)

[交流] 关于蛋白引物PCR问题

一些相关文献中,蛋白引物PCR时退火温度不但不遵守Tm减去5的一般引物设计规律,有的甚至比引物Tm值还高上5度,请问一下这个有什么影响么?还是都是通过温度梯度摸索出来的呢?

设计了一对蛋白引物,Tm值为72.82,这个Tm值目前为止见过最高的一个。GC含量为52.17%

[ Last edited by 蓝色基因 on 2009-4-7 at 18:15 ]
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


350784478(金币+1):谢谢
各个软件Tm的计算方法并不一样
我倒是建议更具引物合成单上写的50mM Na+强度下的Tm值加3~5度作为退火温度,每次我都能做出来
2楼2009-04-07 17:08:52
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

=v=另外,没有所谓的“蛋白质”引物……非常不专业的说法……
3楼2009-04-07 17:09:26
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蓝色基因

金虫 (正式写手)

非常不好意思!已经改为蛋白引物。

我用的是生工合成的引物,引物说明书上提供的是 1 M Na+的Tm值,为88.22,请问
该怎么换算成你说的50 mM再加上3-5度呢。

再次感谢。
4楼2009-04-07 18:18:47
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蓝色基因

金虫 (正式写手)

没有其他做蛋白的兄弟们,大家顶一下。
5楼2009-04-08 13:26:08
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allen8368

木虫 (正式写手)

蛋白引物是什么东东?
慢慢的认识你,再慢慢的忘记你...........
6楼2009-04-08 15:55:31
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

呃……居然只有1M Na+的数据,那太诡异了……
只好根据primer 5当初设计出来的减3~5度的经验了
或者输入到oligo analyzer去分析,google一下
7楼2009-04-08 16:10:11
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sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader

我也有点懵了,从来没听说过蛋白引物,你是pcr吗?pcr蛋白?应该是编码蛋白基因序列的引物吧
会当凌绝顶,一览众山小
8楼2009-04-08 16:33:52
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蓝色基因

金虫 (正式写手)

唉,又被看出来了。

半路出家做蛋白看来真的很难啊。

“编码蛋白基因序列的引物”!
9楼2009-04-08 21:54:58
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